{"id":1194,"date":"2017-09-22T16:49:44","date_gmt":"2017-09-22T16:49:44","guid":{"rendered":"http:\/\/www3.uah.es\/dianas\/journal\/?p=1194"},"modified":"2017-09-22T16:49:44","modified_gmt":"2017-09-22T16:49:44","slug":"dianas-2017-6-2-e20170903-lopez-gutierrez-etal-introduccion-del-sistema-crisprcas9-en-leishmania-infantum","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/dianas.web.uah.es\/journal\/dianas-2017-6-2-e20170903-lopez-gutierrez-etal-introduccion-del-sistema-crisprcas9-en-leishmania-infantum\/","title":{"rendered":"dianas 6 (2) L\u00f3pez-Guti\u00e9rrez etal 2017 Introducci\u00f3n del sistema CRISPR\/Cas9 en Leishmania infantum."},"content":{"rendered":"<div class='ad_single_article'>\n<p class='ad_single_article_SO'><a href='https:\/\/dianas.web.uah.es\/journal\/dianas-6-2\/#dianas-2017-6-2-e20170903-lopez-gutierrez-etal-introduccion-del-sistema-crisprcas9-en-leishmania-infantum'>dianas 6(2)<br \/><\/a> &gt; <a href='https:\/\/dianas.web.uah.es\/journal\/dianas-2017-6-2-e20170903-lopez-gutierrez-etal-introduccion-del-sistema-crisprcas9-en-leishmania-infantum\/'>L\u00f3pez-Guti\u00e9rrez etal<br \/><\/a><\/p>\n\n<p class='signature'>dianas | Vol 6 Num 2 | septiembre  2017 | e20170903<br \/><\/p>\n\n<p class='w_title ad_single_article_title'>Introducci\u00f3n del sistema CRISPR\/Cas9 en <i>Leishmania infantum<\/i><br \/><\/p>\n\n<p class='w_authors ad_single_article_authors'>Celia&nbsp;L\u00f3pez&nbsp;Guti\u00e9rrez<br&nbsp;\/>, Juan&nbsp;Carlos&nbsp;Garc\u00eda&nbsp;Soriano<br&nbsp;\/>, H\u00e9ctor&nbsp;Elessar&nbsp;de&nbsp;Lucio&nbsp;Ortega<br&nbsp;\/>, Antonio&nbsp;Jim\u00e9nez&nbsp;Ru\u00edz<br&nbsp;\/><\/p>\n\n<p class='w_address ad_single_article_address'>Unidad de Bioqu\u00edmica y Biolog\u00eda Molecular, Departamento de Biolog\u00eda de Sistemas, Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud, Universidad de Alcal\u00e1, 28871 Alcal\u00e1 de Henares, Madrid, Espa\u00f1a.<br \/><\/p>\n\n<p class='w_mail ad_single_article_mail'>antonio.jimenez@uah.es<br \/><\/p>\n\n<p class='w_abstract_caption ad_single_article_abstract_caption'>Resumen<\/p>\n<p class='w_abstract ad_single_article_abstract'>El sistema procariota CRISPR\/Cas9 (clustered regularly interspaced short palindromic repeats \/CRISPR-associated) ha sido adaptado para desarrollar una t\u00e9cnica de edici\u00f3n gen\u00f3mica con gran especifidad. Este sistema consiste en un RNA gu\u00eda que conduce a la prote\u00edna Cas9 a una secuencia diana dentro del genoma para generar un corte de doble cadena, provocando la deleci\u00f3n de genes o la introducci\u00f3n de etiquetas. En el g\u00e9nero de par\u00e1sitos <em>Leishmania, <\/em>la complejidad de su genoma ha dificultado la implantaci\u00f3n de otras t\u00e9cnicas de ingenier\u00eda g\u00e9nica. Sin embargo, el sistema CRISPR\/Cas9 ha demostrado ser eficiente en estos organismos. En 2015, se delecion\u00f3 por primera vez un gen en el g\u00e9nero <em>Leishmania, <\/em>concretamente enla especie <em>Leishmania major,<\/em> mediante esta t\u00e9cnica. El objetivo del presente trabajo ha sido la puesta a punto del mismo sistema CRISPR\/Cas9 en <em>Leishmania infantum <\/em>realizando la deleci\u00f3n del gen que codifica para la prote\u00edna fluorescente verde (GFP)<em>. <\/em>Para ello, se transfectaron par\u00e1sitos portadores del gen de GFP con el vector pTCas9 para conseguir una expresi\u00f3n de la prote\u00edna Cas9. Por otra parte, se modific\u00f3 un vector, pLS, el cual expresaba el RNA gu\u00eda y conten\u00eda un \u201ccassette\u201d donador de DNA que confiere resistencia a puromicina a los par\u00e1sitos con el gen de GFP delecionado. Este vector se transfect\u00f3 en los par\u00e1sitos bajo cuatro condiciones diferentes: 100 \u03bcg y 15 \u03bcg de vector circular y 100 \u03bcg y 15 \u03bcg de vector lineal. Mediante citometr\u00eda de flujo, determinando la fluorescencia de los par\u00e1sitos, se observ\u00f3 una disminuci\u00f3n de par\u00e1sitos con expresi\u00f3n de GFP, lo que indic\u00f3 que el gen hab\u00eda sido delecionado. De las cuatro condiciones utilizadas, la \u00fanica condici\u00f3n eficaz fue la transfecci\u00f3n de 100 \u03bcg de vector pLS circular. Este sistema ha demostrado no ser 100% eficaz por lo que es necesario el aislamiento de par\u00e1sitos con el gen de GFP delecionado.<br \/><\/p>\n\n<div class='ad_single_article_citation_box'>\n<\/div>\n\n<\/div>\n\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"footnotes":""},"categories":[5,43,2],"tags":[],"class_list":["post-1194","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-article","category-dianas-vol-6-num-2","category-vols-1-9"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/dianas.web.uah.es\/journal\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/1194","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/dianas.web.uah.es\/journal\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/dianas.web.uah.es\/journal\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/dianas.web.uah.es\/journal\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/dianas.web.uah.es\/journal\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=1194"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/dianas.web.uah.es\/journal\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/1194\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/dianas.web.uah.es\/journal\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=1194"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/dianas.web.uah.es\/journal\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=1194"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/dianas.web.uah.es\/journal\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=1194"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}