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dianas 6 (2) Benítez-Fernández etal 2017 Búsqueda de fármacos multidiana en el tratamiento del Alzheimer (proyecto teórico).

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dianas | Vol 6 Num 2 | septiembre 2017 | e20170907

Búsqueda de fármacos multidiana en el tratamiento del Alzheimer (proyecto teórico).

Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.

arobenitezfdez@gmail.com

Resumen

El Alzheimer es una enfermedad neurodegenerativa del sistema nervioso central con etiología idiopática, caracterizada por una pérdida progresiva de la función intelectual. Las repercusiones económicas son muy importantes ya que es un proceso patológico crónico que genera incapacidad laboral, carga física y psíquica de los cuidadores y además requiere atención social y sanitaria [1]. El mecanismo molecular que por el cual se produce la patología del Alzheimer no está completamente esclarecido, aunque sí se sabe que se caracteriza por la formación intracelular de ovillos neurofibrilares (NFTs) de agregados de proteína tau hiperfosforilada en las células del sistema nervioso central y por la deposición extracelular de placas formadas por agregados de la proteína β-amiloide (Aβ), debido al mal procesamiento por parte de la enzima β-secretasa. Estos agregados junto con la presencia de tejido dañado en el cerebro producen una estimulación de la inflamación crónica, en la que interviene el receptor de membrana RAGE [2]. Puesto que se trata de una enfermedad multifactorial, para la que no existe un tratamiento farmacológico eficaz, solo paliativo, la estrategia que propone este trabajo es la búsqueda de un fármaco multidiana que actúe sobre dos de los componentes más relevantes en el desarrollo de la enfermedad: -secretasa y el receptor RAGE [3]. De este modo, hipotetizamos que se conseguirá un efecto sinérgico, ya que se frenará el progreso de la enfermedad al reducir la deposición de beta-amiloides y se reducirá la inflamación, mejorando la función cognitiva. Para ello, se plantea la realización de un ensayo HTS, mediante la técnica de transferencia de energía de resonancia fluorescente (FRET), que permita el cribado sobre una quimioteca, con el fin de encontrar posibles compuestos candidatos a inhibir las dos dianas seleccionadas. Para evitar los posibles efectos adversos, sería necesario realizar diversos ensayos tanto de toxicidad hepática como sistémica, así como establecer una óptima vía de administración y vehiculización.

Cita: Benítez Fernández, Rocío; Langtry Yáñez, Alberto; López Gutiérrez, Celia; Ortiz del Castillo, Belén; Soto Neira, Altea (2017) Búsqueda de fármacos multidiana en el tratamiento del Alzheimer (proyecto teórico). dianas 6 (2): e20170907. ISSN 1886-8746 journal.dianas.e20170907 http://www3.uah.es/dianas?e20170907. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

Copyright: © Benítez-Fernández R, Langtry-Yáñez A, López-Gutiérrez C, Ortiz-del-Castillo B, Soto-Neira A. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 6 (2) Benítez-Fernández etal 2017 Modulación de la patología de TDP-43 por inhibidores selectivos de TTBK1.

dianas 6(2) > Benítez-Fernández etal

dianas | Vol 6 Num 2 | septiembre 2017 | e20170906

Modulación de la patología de TDP-43 por inhibidores selectivos de TTBK1.

1. Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Grupo de Química Médica y Biológica traslacional, Departamento de Biología Físico-Química, Centro de Investigaciones Biológicas, CSIC, 28040 Madrid, Madrid, España.

arobenitezfdez@gmail.com

Resumen

La esclerosis lateral amiotrófica es una enfermedad neurodegenerativa que cursa con la pérdida progresiva de las motoneuronas. Es una patología de origen desconocido y multifactorial que en el 97% de los pacientes se caracteriza por inclusiones citoplasmáticas de TDP-43 (proteína TAR de unión a ADN/ARN). Esta proteína se localiza principalmente en el núcleo donde desempeña funciones esenciales y relacionadas con la regulación del ARN y la plasticidad neuronal; sin embargo, en condiciones patológicas se trasloca al citoplasma donde es fosforilada, favoreciendo su agregación y la formación de depósitos citoplasmáticos responsables de la degeneración neuronal. Las quinasas involucradas en la fosforilación de TDP-43 son CK1, CDC7, TTBK2 y TTBK1, siendo esta última la diana de interés en este trabajo. TTBK1 es una tau-tubulina quinasa específica del sistema nervioso central, y recientemente, se ha demostrado en un modelo de C. elegans que es una de las enzimas responsables de regular la fosforilación de TDP-43. Se seleccionaron una serie de inhibidores selectivos para TTBK1 de los cuales se estudiaron sus propiedades físico-químicas in silico, su coeficiente de permeabilidad de la barrera hematoencefálica in vitro y sus efectos neuroprotectores mediante la disminución de los niveles de TDP-43 in vivo. Nuestros resultados parecen mostrar un efecto neuroprotector de los inhibidores selectivos de TTBK1 y un posible abordaje novedoso para el tratamiento de esta patología.

Cita: Benítez Fernández, Rocío; Martínez González, Loreto; Nozal García, Vanesa; Martín-Requero, Ángeles; Martínez Gil, Ana (2017) Modulación de la patología de TDP-43 por inhibidores selectivos de TTBK1. dianas 6 (2): e20170906. ISSN 1886-8746 journal.dianas.e20170906 http://www3.uah.es/dianas?e20170906. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

Copyright: © Benítez-Fernández R, Martínez-González L, Nozal-García V, Martín-Requero, Martínez-Gil A. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 6 (2) Dávila-Martínez etal 2017 Estudio de la senescencia linfocitaria T en pacientes con lesión de médula espinal crónica.

dianas 6(2) > Dávila-Martínez etal

dianas | Vol 6 Num 2 | septiembre 2017 | e20170905

Estudio de la senescencia linfocitaria T en pacientes con lesión de médula espinal crónica.

1. Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Laboratorio de Medicina individualizada traslacional en inflamación y cáncer, departamento de medicina y especialidades médicas, facultad de medicina, Universidad de Alcalá, Alcalá de Henares, Madrid, España.

asergio.davila@edu.uah.es  bdavid.diaz@uah,es

Resumen

La Lesión de Médula Espinal (LME) es una patología grave que causa un daño que conduce a cambios irreversibles en el sistema nervioso central, provocando con ello una elevada discapacidad y morbilidad en las personas que la padecen, así como disminución en su esperanza de vida. Como consecuencia del daño primario en la médula espinal se desencadena un proceso inflamatorio en el que interviene el sistema inmunológico (SI), que mantiene este estado inflamatorio de forma prolongada en el tiempo. Se han demostrado alteraciones en el sistema inmune tanto innato como adaptativo, durante una primera fase aguda, y existen diferentes estudios que demuestran que estas alteraciones se mantienen durante una fase crónica de la enfermedad. En otras patologías de base inmunológica se ha evidenciado una senescencia prematura del SI como consecuencia de este estado inflamatorio crónico. La hipótesis de este trabajo establece que los pacientes con LME presentan un estado de envejecimiento prematuro del SI, y concretamente del compartimento linfocitario T. Se realiza una caracterización de los linfocitos T cooperadores (Th) y citotóxicos (Tc) en células mononucleares de sangre periférica (PBMCs), obtenidas de muestras de sangre de pacientes con LME en estado crónico y controles sanos. Los resultados obtenidos muestran alteraciones en el compartimento linfocitario T de pacientes con LME crónica, con un estado linfocitario altamente diferenciado, una pequeña disminución del receptor coestimulador CD28, una disminución de la población de linfocitos T no activados apoptóticos, un aumento de la población de linfocitos T activados apoptóticos y un aumento de las células T reactivas específicas contra MBP. Esto se traduce en un envejecimiento del SI en estos pacientes con LME, que podría provocar una disfunción inmunitaria que conllevara la aparición de infecciones y predispusiera al desarrollo de una enfermedad autoinmune.

Cita: Dávila Martínez, Sergio; Haro Girón, Sergio; López Suárez, Andrea; Oliva Martín, Raquel; Díaz Martín, David (2017) Estudio de la senescencia linfocitaria T en pacientes con lesión de médula espinal crónica. dianas 6 (2): e20170905. ISSN 1886-8746 journal.dianas.e20170905 http://www3.uah.es/dianas?e20170905. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

Copyright: © Dávila-Martínez S, Haro-Girón S, López-Suárez A, Oliva-Martín R, Díaz-Martín D. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 6 (2) Hernández-López etal 2017 Aplicación de la técnica de Hibridación Genómica Comparada en el diagnóstico y seguimiento de los pacientes con melanoma.

dianas 6(2) > Hernández-López etal

dianas | Vol 6 Num 2 | septiembre 2017 | e20170904

Aplicación de la técnica de Hibridación Genómica Comparada en el diagnóstico y seguimiento de los pacientes con melanoma.

1. Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Instituto i+12, Hospital Universitario 12 de Octubre, 28041, Madrid, España.

apatri.hl.94@gmail.com

Resumen

Los melanocitos pueden originar distintos tipos de neoplasias, que se clasifican según su comportamiento biológico en benignas (nevi y nódulos proliferativos) y malignas (melanomas). Habitualmente el diagnóstico diferencial entre ellas se realiza mediante análisis histopatológicos rutinarios. Sin embargo, en ocasiones estos no son suficientes, por lo que, debido a la diferente importancia clínica existente entre estas neoplasias, se hace necesario utilizar técnicas más precisas. Entre éstas destaca la Hibridación Genómica Comparada (CGH), cuyo uso está empezando a aplicarse en el diagnóstico de estos tumores, pues se ha observado que la ganancia y/o pérdida de material genético es común en los melanomas, al contrario que los nevi, que no presentan aberraciones cromosómicas. El kit OncoScan FFPE Assay utilizado en este estudio está diseñado específicamente para trabajar con muestras fijadas en formalina y embebidas en parafina (FFPE), facilitando el empleo de esta técnica para el diagnóstico de este tipo de muestras en la rutina hospitalaria. Por otra parte, este kit permite analizar el ADN circulante obtenido a partir de plasma, lo cual podría tener gran relevancia en el seguimiento y monitorización de pacientes con melanoma. En este trabajo se analizaron muestras de tejido FFPE de 23 melanomas, 11 nevi y 1 nódulo proliferativo mediante CGH, con el fin de determinar las aberraciones genómicas más frecuentes en cada tipo de lesión. Asimismo, se analizó por CGH el ADN circulante del plasma de dos pacientes con melanoma metastásico. Los resultados hallados demostraron la capacidad de esta técnica para detectar aberraciones cromosómicas en plasma, que además fueron comparadas con las alteraciones encontradas en el tejido tumoral de los mismos pacientes, revelando cierta semejanza entre ellas. Los hallazgos obtenidos en este trabajo apoyan el uso de la CGH tanto para el diagnóstico de melanoma como para evaluar el seguimiento de los pacientes que lo padecen.

Cita: Hernández López, Patricia; Rodríguez Peralto, José Luis; Ruano Domínguez, Yolanda (2017) Aplicación de la técnica de Hibridación Genómica Comparada en el diagnóstico y seguimiento de los pacientes con melanoma. dianas 6 (2): e20170904. ISSN 1886-8746 journal.dianas.e20170904 http://www3.uah.es/dianas?e20170904. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

Copyright: © Hernández-López P, Rodríguez-Peralto JL, Ruano-Domínguez Y. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 6 (2) López-Gutiérrez etal 2017 Introducción del sistema CRISPR/Cas9 en Leishmania infantum.

dianas 6(2) > López-Gutiérrez etal

dianas | Vol 6 Num 2 | septiembre 2017 | e20170903

Introducción del sistema CRISPR/Cas9 en Leishmania infantum

Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.

aantonio.jimenez@uah.es

Resumen

El sistema procariota CRISPR/Cas9 (clustered regularly interspaced short palindromic repeats /CRISPR-associated) ha sido adaptado para desarrollar una técnica de edición genómica con gran especifidad. Este sistema consiste en un RNA guía que conduce a la proteína Cas9 a una secuencia diana dentro del genoma para generar un corte de doble cadena, provocando la deleción de genes o la introducción de etiquetas. En el género de parásitos Leishmania, la complejidad de su genoma ha dificultado la implantación de otras técnicas de ingeniería génica. Sin embargo, el sistema CRISPR/Cas9 ha demostrado ser eficiente en estos organismos. En 2015, se delecionó por primera vez un gen en el género Leishmania, concretamente enla especie Leishmania major, mediante esta técnica. El objetivo del presente trabajo ha sido la puesta a punto del mismo sistema CRISPR/Cas9 en Leishmania infantum realizando la deleción del gen que codifica para la proteína fluorescente verde (GFP). Para ello, se transfectaron parásitos portadores del gen de GFP con el vector pTCas9 para conseguir una expresión de la proteína Cas9. Por otra parte, se modificó un vector, pLS, el cual expresaba el RNA guía y contenía un “cassette” donador de DNA que confiere resistencia a puromicina a los parásitos con el gen de GFP delecionado. Este vector se transfectó en los parásitos bajo cuatro condiciones diferentes: 100 μg y 15 μg de vector circular y 100 μg y 15 μg de vector lineal. Mediante citometría de flujo, determinando la fluorescencia de los parásitos, se observó una disminución de parásitos con expresión de GFP, lo que indicó que el gen había sido delecionado. De las cuatro condiciones utilizadas, la única condición eficaz fue la transfección de 100 μg de vector pLS circular. Este sistema ha demostrado no ser 100% eficaz por lo que es necesario el aislamiento de parásitos con el gen de GFP delecionado.

Cita: López Gutiérrez, Celia; García Soriano, Juan Carlos; de Lucio Ortega, Héctor Elessar; Jiménez Ruíz, Antonio (2017) Introducción del sistema CRISPR/Cas9 en Leishmania infantum. dianas 6 (2): e20170903. ISSN 1886-8746 journal.dianas.e20170903 http://www3.uah.es/dianas?e20170903. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

Copyright: © López-Gutiérrez C, García-Soriano JC, de-Lucio-Ortega HE, Jiménez-Ruíz A. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 6 (2) Marina-Arroyo etal 2017 RasGRP1 promueve la activación de la vía PDK-1/AKT/mTOR independientemente de su actividad.

dianas 6(2) > Marina-Arroyo etal

dianas | Vol 6 Num 2 | septiembre 2017 | e20170902

RasGRP1 promueve la activación de la vía PDK-1/AKT/mTOR independientemente de su actividad.

1. Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Departamento de Inmunología y Oncología, Centro Nacional de Biotecnología, Consejo Superior de Investigaciones Científicas, 28049 Madrid, España.

ai.merida@cnb.csic.es

Resumen

RasGRP1 es un factor intercambiador de nucleótidos de Ras con un papel crucial en la activación de ERK a través del receptor de células T (TCR). RasGRP1 participa en la selección positiva de timocitos y en la activación de células T en periferia. La vía de ERK es la ruta canónica en la que está implicado RasGRP1, sin embargo, estudios recientes sugieren que RasGRP1 puede participar en la activación de otras cascadas de señalización. En este trabajo hemos estudiado el papel de RasGRP1 en la señalización basal de linfocitos T utilizando dos mutantes de la variante silvestre de RasGRP1. Uno contiene una mutación en el dominio catalítico, R271E, que provoca la pérdida de su actividad catalítica. La otra mutación está situada en el dominio de unión a calcio, E521A, y provoca un cambio estructural que no afecta la actividad catalítica. Los mutantes se transfectaron en células Jurkat y se determinó su efecto en la señalización basal y en combinación con distintos tratamientos farmacológicos. Nuestros resultados indican que RasGRP1 está implicado en la activación del eje PDK-1/AKT/mTOR independientemente de su actividad catalítica.

Cita: Marina Arroyo, Marta; Arranz-Nicolás, Javier; Arcos, Raquel; Ávila-Flores, Antonia; Mérida, Isabel (2017) RasGRP1 promueve la activación de la vía PDK-1/AKT/mTOR independientemente de su actividad. dianas 6 (2): e20170902. ISSN 1886-8746 journal.dianas.e20170902 http://www3.uah.es/dianas?e20170902. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

Copyright: © Marina-Arroyo M, Arranz-Nicolás J, Arcos R, Ávila-Flores A, Mérida I. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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Dianas 6(2)

dianas Vol. 6 | No. 2 | Septiembre 2017
Dianas 6(2)
Monográfico

XI Máster en Dianas Terapéuticas en Señalización Celular, Investigación y Desarrollo – 2016-2017

Editores: M. J. Carmena y A. Domingo

El presente número incluye artículos correspondientes a Proyectos Fin de Máster seleccionados entre los presentados y defendidos al finalizar la XI edición del Máster en Dianas Terapéuticas en Señalización Celular, Investigación y Desarrollo, en el curso 2016-2017.

Tabla de contenidos

RasGRP1 promueve la activación de la vía PDK-1/AKT/mTOR independientemente de su actividad.
Introducción del sistema CRISPR/Cas9 en Leishmania infantum
Aplicación de la técnica de Hibridación Genómica Comparada en el diagnóstico y seguimiento de los pacientes con melanoma.
Estudio de la senescencia linfocitaria T en pacientes con lesión de médula espinal crónica.
Modulación de la patología de TDP-43 por inhibidores selectivos de TTBK1.
Búsqueda de fármacos multidiana en el tratamiento del Alzheimer (proyecto teórico).