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dianas | Vol 13 Num 1 | marzo 2024 | e202403x030

Estudio de la resensibilización de células colorrectales resistentes a inhibidores de PLK1 mediante el silenciamiento de la DNA polimerasa theta.

Carolina Guerrero-Amelín^a, Yuliia Fatych^b, Laura del Puerto-Nevado, Pedro Antonio Mateos-Gómez

Unidad de Bioquímica y Biología Molecular. Departamento de Biología de Sistemas. Universidad de Alcalá.

a. carolina.guerreroa@uah.es  b. yuliia.fatych@uah.es

IX Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2024.
XVIII Simposio de Dianas Terapéuticas.
18 a 22 de marzo, 2024. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: polimerasa theta; silenciamiento; inhibidor; resistencia

Resumen

El cáncer colorrectal es el tercer tipo de cáncer con más incidencia a nivel mundial y el segundo con mayor mortalidad. Generalmente, comienza como grupos pequeños de células llamados pólipos que se forman en el interior del colon. Aunque la mayoría son benignos, algunos pueden convertirse en tipos de cáncer de colon con el tiempo. Si se desarrolla cáncer de colon, existen varios tratamientos disponibles, como la cirugía, la radioterapia, la quimioterapia y la inmunoterapia. Una de las estrategias empleadas contra este tipo de cáncer es el uso de inhibidores de PLK1, una quinasa implicada en la regulación del ciclo celular y de la reparación del DNA mediante recombinación homóloga. Los inhibidores de la Polo-like kinase 1, como el BI2536 se han probado en ensayos clínicos, pero la rápida adquisición de resistencia ha hecho que no se lleguen a implantar como una opción de tratamiento. Nuestro objetivo es estudiar si tanto las células que son sensibles como resistentes a este inhibidor reducen su viabilidad sin la actividad de la DNA Polimerasa Theta (PolQ), la cual está implicada en la reparación del DNA en un mecanismo que compite con la recombinación homóloga. PolQ está sobreexpresada en células tumorales, donde contrarresta el estrés replicativo y la inestabilidad genómica. Las células HCT116 sensibles y resistentes al BI2536 fueron sembradas en placas multi well. Se infectaron con lentivirus PLKO.1_shControl y PLKO.1_shPolQ para el silenciamiento de PolQ, y después fueron seleccionadas con puromicina. A continuación, se procedió al contaje y la siembra de ambas líneas para la realización de ensayos de viabilidad celular (MTT) y ensayos de formación de colonias. La expresión de RNA mensajero de PolQ se cuantificó en ambas líneas celulares, sensibles y resistentes al BI2536, obteniéndose una expresión del 14 y 11% respectivamente. En ambos ensayos, la línea resistente siempre se cultivó en presencia del BI2536. La línea sensible recibió la dosis IC50 del BI2536 3 días previos al ensayo del MTT. El silenciamiento de PolQ disminuyó la capacidad proliferativa de las células de la línea de cáncer de colon HCT116, independientemente de que éstas fueran o no resistentes al inhibidor de PLK1. Aunque las células resistentes a BI2536 no se resensibilizaron a este inhibidor mediante el silenciamiento de PolQ, el tratamiento combinado con BI2536 y el silenciamiento de PolQ de células HCT116 sensibles condujo a una reducción de la proliferación celular mayor que con cada uno de los tratamientos por separado.