dianas 8(2) > Ayuso-García etal

dianas | Vol 8 Num 2 | septiembre 2019 | e201909fa09

Papel de CEBPD en el desarrollo de resistencias del cáncer de próstata al tratamiento hormonal y su posible regulación por AR-V7

Paula Ayuso García, Santiago Ropero Salinas, Begoña Colás Escudero

Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina y Ciencias de la salud, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.

Palabras clave: Cáncer de próstata; receptor de andrógenos; variante de splicing AR-V7 del receptor de andrógenos; ablación androgénica; proteína delta de unión al potenciador CCAAT (CEBPD)

Resumen

El cáncer de próstata (CP) es la segunda causa de muerte por cáncer en hombres en el mundo occidental. Inicialmente, el desarrollo del CP es dependiente de andrógenos, por lo que, el tratamiento convencional consiste en la ablación androgénica. Aunque se consigue la regresión del tumor, en un alto porcentaje de pacientes progresa hacia formas más agresivas de la enfermedad denominadas cáncer de próstata resistente a la castración (CRPC). Entre los mecanismos por los cuales se desarrolla la resistencia se ha descrito el incremento de la variante de splicing AR-V7 del receptor de andrógenos (AR). Basándonos en estudios previos en los que se definió el perfil de metilación en CRPC, se seleccionó CEBPD por estar silenciado por metilación de su promotor en una línea celular de CRPC (LNCaP abl), mientras que sí se expresa en células de cáncer de próstata sensibles a andrógenos (LNCaP). En este trabajo nos planteamos un doble objetivo: determinar el posible papel de AR-V7 en la regulación de CEBPD en las células LNCaP abl e intentar esclarecer el papel de este gen en el desarrollo de la resistencia de los tumores de próstata a la ablación androgénica. Nuestros resultados indican que AR interacciona con el promotor de CEBPD en células LNCaP, mientras que en células LNCaP abl se unen tanto AR como AR-V7. Por otro lado, se observó que el silenciamiento de CEBPD en células LNCaP induce apoptosis y, sorprendentemente, también aumenta la migración e invasión. A la vista de estos resultados podemos concluir: en primer lugar, que AR-V7 podría estar reprimiendo la expresión de CEBPD en células CRPC mediante el reclutamiento de complejos represores; en segundo lugar, que CEBPD podría desempeñar un papel dual impidiendo la apoptosis, así como la migración e invasión en células de cáncer de próstata sensibles a andrógenos.

dianas 8(2) > Baños-Sánchez etal

dianas | Vol 8 Num 2 | septiembre 2019 | e201909fa08

Estudio del potencial de bioconjugados Quantum Dots para el marcaje específico de dianas involucradas en Esclerosis Lateral Amiotrófica.

Nerea Baños Sánchez, Carlota Tosat- Bitrián, Valle Palomo

1. Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Grupo de Biosensores y Química Biológica, Centro de Investigaciones Biológicas- CSIC, Madrid, España.

a. nere11a@hotmail.com

Palabras clave: Multicolor Multicycle Molecular profiling (M3P); esclerosis lateral amiotrófica (ELA); Quantum Dots (QDs); inmunoensayo

Resumen

La investigación biomédica se encuentra en continuo avance y requiere la implantación de técnicas novedosas y prometedoras que permitan esclarecer mecanismos de enfermedades y seleccionar medicamentos eficaces para las mismas. El fin de estas técnicas es poder aplicar un tratamiento individualizado a cada paciente, es decir, implantar la medicina personalizada y para ello son necesarios biomarcadores y sensores efectivos. La técnica Multicolor Multicycle Molecular profiling (M3P), la cual se quiere aplicar en patologías de gran complejidad molecular como la esclerosis lateral amiotrofia (ELA), entre otras, utiliza Quantum Dots (QDs), nanopartículas con características fotoluminiscentes únicas y ventajosas sobre los fluoróforos tradicionales y con gran potencial como herramienta puntera en el campo de la biomedicina. En este trabajo se muestran los resultados obtenidos tras la realización de distintos inmunoensayos de QDs para estudiar su efectividad de marcaje de proteínas, la penetrabilidad en el núcleo y en consecuencia su potencial para seleccionar fármacos eficaces para patologías complejas como la ELA.

dianas 8(2) > Moreno-de-la-Cruz y García-Gonzalo

dianas | Vol 8 Num 2 | septiembre 2019 | e201909fa07

Estudio de la interaccióndel receptor Htr6 de serotonina con las proteínas Cdk5 y TULP3.

Paula Moreno de la Cruz, Francesc García Gonzalo

1. Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina y Ciencias de la salud, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Departamento de Modelos Experimentales de Enfermedades Humanas, Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto Sols, 28029 Madrid, España.

a. pmoreno.bm@gmail.com  b. francesc.garcia@uam.es

Palabras clave: Cdk5; CLS; dominio C-terminal; dominio N-terminal; Htr6; TULP3

Resumen

Los cilios primarios son prolongaciones de la membrana plasmática en cuya membrana hay una gran cantidad de canales iónicos y receptores como los GPCRs. En concreto, nuestro estudio lo centramos en el receptor ciliar Htr6 de serotonina, el cual es un GPCR de la familia de las rodopsinas, de gran importancia a nivel neuronal. Aunque sus mecanismos de señalización son poco conocidos todavía, se ha visto que este receptor interacciona mediante su extremo C-terminal con una gran cantidad de proteínas implicadas en diferentes vías de señalización. Mediante ensayos de coinmunoprecipitación en células HEK293T, hemos estudiado la interacción del receptor Htr6 con una proteína efectora denominada Cdk5, la cual fosforila dicho receptor. Sin embargo, no obtuvimos resultados que confirmen dicha unión. Por otro lado, el tráfico ciliar de las proteínas de membrana al cilio, incluido el receptor Htr6, es poco conocido por lo que en este estudio esclarecemos el mecanismo de transporte. Para ello, realizamos ensayos de interacción por biotinilación en células HEK293T para analizar la interacción del receptor Htr6 con la proteína TULP3, la cual actúa como proteína adaptadora para el tráfico ciliar de proteínas de membrana. En concreto, estudiamos la interacción de la proteína TULP3 completa, y de sus dominios N-terminal y C-terminal con la CLS del dominio C-terminal del receptor Htr6. De acuerdo con el modelo actual que explica el tráfico ciliar de proteínas de membrana, observamos la interacción entre el extremo C-terminal del receptor Htr6 con el dominio C-terminal de la proteína TULP3. Esto nos permitirá conocer el mecanismo de entrada de ciertas proteínas en el cilio.

dianas 8(2) > Serrano-García etal

dianas | Vol 8 Num 2 | septiembre 2019 | e201909fa06

Análisis molecular de las relaciones entre hiperlipidemia y fibrosis vascular.

Lucía Serrano-García, Ana Asenjo-Bueno, Kevin Henández-López, Elena Alcalde-Estévez, Patricia Plaza, Patricia Sosa, Gemma Olmos, María Piedad Ruíz-Torres, Susana López Ongil

1. Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Fundación para la Investigación Biomédica del Hospital Universitario Príncipe de Asturias, Alcalá de Henares, Madrid, España.  3. Dpto. Biología de Sistemas, Universidad de Alcalá, Alcalá de Henares, Madrid, España.  4. Instituto Reina Sofía de Investigación Nefrológica (IRSIN) y Red Renal (REDinREN) del ISCIII, Madrid, España.

Palabras clave: Hiperlipidemia; OxLDL; fibrosis vascular; NFkB; ET-1; ROS

Resumen

La hiperlipidemia es uno de los desórdenes metabólicos más implicados en enfermedades cardiovasculares como la aterosclerosis que cursa con un aumento de LDL oxidadas (OxLDL) en sangre. El objetivo del estudio fue establecer la relación entre hiperlipidemia y fibrosis vascular, evaluando los mecanismos implicados. Para ello, se incubaron células endoteliales con OxLDL encontrando un aumento tanto en la expresión de fibronectina como en la producción de radicales libres. Las OxLDL revelaron la activación del factor de transcripción NFkB vía producción de radicales libres. Además, experimentos con EMSA confirman que el factor NFkB está implicado directamente en el aumento de la expresión de fibronectina estimulado por las OxLDL en células endoteliales. Por otro lado, las OxLDL son capaces de inducir la expresión del enzima conversor de endotelina-1 y la producción de endotelina-1 (ET-1). La ET-1 sintetizada en células endoteliales se libera y llega a otros tipos celulares. Por tanto, se analizó el efecto directo de la ET-1 en células musculares lisas (CML). La ET-1 también estimula fibrosis en CML medida como expresión de la proteína pro-fibrótica CTGF y las proteínas de MEC, fibronectina y colágeno I. La ET-1 también favorece la producción de radicales libres. El efecto de la ET-1 sobre la fibrosis fue específico de su unión al receptor ETA presente en CML, porque el antagonista específico BQ123 bloqueó completamente el efecto de la ET-1. En conclusión, durante la aterosclerosis se favorecerían los procesos de fibrosis tanto a nivel endotelial por las OxLDL como a nivel muscular por la ET-1 generada por ellas, que podría ser la causa de la disfunción vascular presente en la aterosclerosis.

dianas 8(2) > Mínguez-Martínez etal

dianas | Vol 8 Num 2 | septiembre 2019 | e201909fa05

Diseño y predicción de promotores específicos de neuroblastoma.

Jorge Mínguez Martínez, Raúl Torres Ruíz, Sandra Rodríguez Perales

1. Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas (CNIO), Madrid, España.

a. jorge_minguez@hotmail.com  b. srodriguezp@cnio.es

Palabras clave: neuroblastoma; promotores específicos; RT-qPCR; clonaje de promotores; citometría

Resumen

El neuroblastoma es una enfermedad infantil caracterizada por el desarrollo de tumores a partir de células cancerígenas del tejido nervioso de las glándulas suprarrenales. Existen marcadores genéticos para caracterizar, clasificar y diagnosticar este tipo de tumores. Un ejemplo de estos marcadores es la amplificación de MYCN, frecuentemente utilizada como herramienta de pronóstico. A pesar de los tratamientos disponibles actualmente, el neuroblastoma es un tipo de cáncer que sigue estando caracterizado por una alta mortalidad. Por este motivo, es necesario el desarrollo de nuevas terapias que dirijan su acción específicamente a este tipo de células tumorales, maximizando su actividad en el tejido diana y reduciendo su toxicidad en otros tejidos. Un ejemplo de este tipo de terapia podría ser la edición génica. Para lograr una expresión específica en un tejido determinado, la expresión de genes terapéuticos debe estar controlada por promotores específicos de ese tejido. Para ello se deben analizar las secuencias promotoras que regulan la transcripción de genes cuya expresión sea restringida a neuroblastoma. Sin embargo, estas secuencias promotoras abarcan grandes regiones de ADN, y los vectores utilizados en terapia génica solamente pueden incorporar secuencias de un tamaño limitado. Por esta razón, se deben seleccionar los fragmentos esenciales que garantizan el funcionamiento del promotor. En este trabajo, se realiza un análisis y predicción de las secuencias fundamentales de cuatro promotores de proteínas expresadas diferencialmente en neuroblastoma para, posteriormente, evaluar su actividad mediante la medida de la expresión de una proteína reportera.

dianas 8(2) > Martino-Zamarriego y Rodríguez

dianas | Vol 8 Num 2 | septiembre 2019 | e201909fa04

Gestión de proyectos de desarrollo de complementos alimenticios en cápsula de gelatina blanda.

Esther Martino Zamarriego, Blanca Rodríguez

1. Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. HC Clover, PS S.L. – Aplicaps, Calle Alicante 8, 28500 Arganda del Rey, Madrid, España.

Palabras clave: HC Clover; gestión de proyectos; complementos alimenticios; cápsula de gelatina blanda; ficha técnica

Resumen

HC Clover es una empresa española de fabricación y desarrollo por contrato, que destaca por el desarrollo de complementos alimenticios en cápsula de gelatina blanda. Cada proyecto de desarrollo de complementos alimenticios es asignado a un gestor de proyectos, que lo dirige desde la fase inicial hasta la final. Para el desarrollo del producto, el cliente escoge la fórmula y el diseño asesorado por los departamentos de nuevas formulaciones y presupuestos. El proyecto presupuestado con el cliente se transfiere al gestor de proyectos, el cual da de alta en el servidor los códigos necesarios para la identificación del producto, garantizando su trazabilidad. A continuación, el gestor de proyectos informa de la fórmula y de las especificaciones acordadas con el cliente al departamento de desarrollo galénico, que se encarga de transformar los ingredientes activos farmacéuticos en la forma farmacéutica de cápsula de gelatina blanda. Tras finalizar el desarrollo galénico, se emite el Drug Master Formula, que recoge la fórmula y las especificaciones físicas del producto. A partir del DMF firmado, el gestor de proyectos elabora la ficha técnica del producto, la cual recoge todas sus especificaciones. Tras ser firmada por el cliente, las cápsulas de gelatina blanda se fabrican utilizando el proceso de rotary-die. Para garantizar la calidad del producto, una vez fabricado y acondicionado, el departamento de control de calidad realiza estudios de estabilidad para determinar su vida útil. Además, el equipo de Regulatory se encarga de gestionar el etiquetado y la notificación de puesta en el mercado del producto. En conclusión, la complejidad del proceso de desarrollo de complementos alimenticios, exige la presencia de un equipo de trabajo cualificado que trabaje bajo la normativa vigente, un buen sistema de calidad y la figura del gestor de proyectos que coordine y supervise todas las fases por las que pasa el proyecto.