dianas 10(1) > Santos etal

dianas | Vol 10 Num 1 | marzo 2021 | e202103a08

Análisis de la variabilidad genética de KIR3DL2 en linfoma cutáneo de células T (SS y MF-t).

Adrián Santos^1, a, Paloma Martín^1, 2, 3, Belén Navarro², Irma Zapata², Carlos Vilches^1, 2, Natalia Gómez-Lozano^1, 2

1. Instituto de Investigación Sanitaria Puerta de Hierro Segovia de Arana (IDIPHISA).  2. Hospital Universitario Puerta de Hierro Majadahonda.  3. Centro de Investigación Biomédica en Red de Cáncer (CIBERONC).

a. asantos@idiphim.org

VI Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2021.
29 de marzo a 30 de abril, 2021. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: micosis fungoide; síndrome de Sézary; KIR; KIR3DL2

Resumen

Introducción: KIR3DL2 es un miembro inhibidor de la familia de los receptores KIR y se expresa típicamente en las células asesinas naturales (Natural Killer cells, células NK) y en una población minoritaria de células T CD8+. Sus ligandos conocidos hasta la fecha son las moléculas de HLA de clase I, HLA-A3 y A11 y la cadena pesada libre de HLA-B27. Además de las moléculas de HLA, KIR3DL2 es capaz de unir motivos CpG del ADN en los endosomas para la activación vía Toll-like receptor 9 (TLR9). Es un receptor con características estructurales y funcionales únicas dentro de su familia. Genéticamente presenta también importantes diferencias respecto a los otros miembros: es muy polimórfico, tiene secuencias reguladoras únicas y lo más reseñable es que es uno de los pocos genes ubicuos en el complejo genético KIR que se caracteriza por tener una gran variabilidad en su composición de genes. La expresión de KIR3DL2 es una característica molecular de algunos linfomas cutáneos de células T (LCCT) como el síndrome de Sézary (SS) y la micosis fungoide transformada (MF-t). En estos LCCT, las células T CD4+ tumorales cutáneas y circulantes expresan KIR3DL2 de forma aberrante, pero su implicación en la etiopatogenia de estas enfermedades y los mecanismos responsables de dicha expresión son desconocidos. Nuestro objetivo es estudiar la variabilidad genética de KIR3DL2 y su posible implicación en los LCCT.

Material y Métodos: realizamos un estudio casos-control sobre una cohorte de muestras de ADN de sangre de 13 individuos con LCCT (SS y MF-t) y una serie de individuos sanos de la misma área geográfica. El sistema de tipificación de KIR3DL2 ha sido diseñado por el grupo y se realiza mediante la amplificación de tres fragmentos del gen por PCR convencional, seguido de un análisis de SNPs de la región codificante por SBT. Las diferencias de las frecuencias de los polimorfismos y las distribuciones genotípicas de KIR3DL2 se calcularon utilizando la prueba χ² de Pearson.

Resultados: las frecuencias genotípicas del polimorfismo 1190 C>T (rs3745902 SNP) en la región que codifica para el dominio ITIM de KIR3DL2 de la serie control son similares a las descritas en poblaciones de ascendencia europea. Los pacientes con SS/MF-t muestran mayor frecuencia del polimorfismo 1190 C>T de KIR3DL2 en comparación con la serie control (77% vs 45%, p= 0,0455).

Conclusión: en nuestro estudio el polimorfismo 1190 C>T (rs3745902 SNP) de KIR3DL2 es un factor genético de riesgo asociado al desarrollo de SS/MF-t. La realización de estudios de expresión de KIR3DL2 nos permitirá profundizar en el papel funcional de esta asociación.

dianas 10(1) > Huertas etal

dianas | Vol 10 Num 1 | marzo 2021 | e202103a07

Exosomal matrix metalloproteinases 2 and 9 in Prostate Cancer.

Raquel Huertas, Laura Muñoz, María Isabel Arenas, Irene de los Dolores Román, Ángeles Sanchís, Ana María Bajo

Universidad de Alcalá.

a. huertas.raquel.1n@gmail.com

VI Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2021.
29 de marzo a 30 de abril, 2021. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Keywords: Prostate cancer; Exosomes; Matrix metalloproteinases; Liquid biopsy

Abstract

Prostate Cancer (PCa) is the second most frequent type of cancer in men around the globe, with an incidence of 1,3 million cases in 2018 and it’s expected to be increased by 79,8% in 2040. Most of the cases are multifocal adenocarcinomas and their differentiation and progression shows an important heterogeneity: while some will stay asymptomatic and localized, some others will spread and cause metastasis, event related to most cases of death due to PCa.
The diagnosis is based on the histological characteristics observed in needle biopsies or radical prostatectomy, using the Gleason Score. Furthermore, the current biomarker, the prostate-specific antigen (PSA), shows poor specificity, which leads to frequent false positive and unnecessary medical interventions. It urges to find a method to distinguish PCa patients from not PCa ones, but it is also essential a parameter that discriminates aggressive tumours from latent ones.
Exosomes are one type of extracellular vesicles, characterized by a diameter of 30-150 nm produced by all types of human cells and they can be found in human fluids, such as blood or urine. In PCa, exosomes contribute to cell transformation, angiogenesis and tumour progression, due to the molecular mediators they carry. Matrix metalloproteinases 2 and 9 (MMPs 2 and 9) are zinc and calcium-dependent endopeptidases that break down extracellular matrix proteins. They are related to aggressive PCa phenotype and they are carried by exosomes.
We suggest that MMP2 and 9 can be used as biomarkers of PCa in liquid biopsy, such as urine. This biochemical analysis of urine samples will be complemented by the immunohistochemistry analysis of needle prostate biopsies. Finally, we will study the effect of isolated exosomes on the neurodifferentiation of androgen-dependent prostate cancer cell line (LNCaP).
Urine and needle biopsies samples were provided by Urology Service of University Hospital Principe de Asturias . Urine samples were processed in order to isolate exosomes. Biochemical analysis, such as Zymography or Western blotting, were performed with non-cancer and cancer samples. Alongside, immunohistochemistry (IHC) study of the expression of several molecules, such as prostatic specific membrane antigen (PSMA) or MMPs, in needle biopsies was conducted. Eventually, LNCaP cells were treated with isolated exosomes from urine of non-cancer and cancer patients.
Preliminary results showed: 1) a higher expression of PSMA in apical cytoplasm of Gleason 6 epithelial cells as compared to non-cancer samples; 2) LNCaP cells treated with exosomes from patients with cancer showed an increment in the percentage of the neuroendocrine differentiation.
In order to complete this research, we will continue examining more urine samples, complete more IHC with different Gleason score and replicate cell culture experiments in the following weeks.

dianas 10(1) > Fatych etal

dianas | Vol 10 Num 1 | marzo 2021 | e202103a06

Fingerprinting metabólico de biopsias líquidas y caracterización de nuevos biomarcadores de cáncer. Aplicación en el diagnóstico temprano y no invasivo de cáncer de próstata.

Yuliia Fatych, Ana María Bajo Chueca, Ángeles Sanchís Bonet, César Menor-Salván

1. Departamento Biología de Sistemas, Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud, Universidad de Alcalá, Madrid.  2. Departamento de Urología, Hospital Universitario Principe de Asturias (HUPA), Madrid.

a. yuliia.fatych@gmail.com

VI Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2021.
29 de marzo a 30 de abril, 2021. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Keywords: Prostate cancer; Raman spectroscopy; Metabolic fingerprinting; Silver nanoparticles

Abstract

A nivel mundial, el cáncer de próstata (CaP) es el segundo tipo de cáncer más incidente en hombres. En España, se sitúa como la primera causa de cáncer en varones. El diagnóstico de CaP suele establecerse en pacientes con síntomas previos. Sin embargo, muchos hombres no experimentan sintomatología alguna y por tanto, sin un proceso de cribado adecuado, no serán conscientes de su enfermedad. Los procesos actuales de cribado consisten en la medición del Antígeno Prostático Específico (PSA) en sangre. Niveles elevados suelen relacionarse con CaP, pero también pueden ser causados por prostatitis o hiperplasia benigna de próstata. Además, sujetos sin ninguna de las anteriores patologías pueden ser clasificados como falsos positivos. Otro posible cribado es el examen rectal digital, una prueba anatómica de limitada especificidad y una baja sensibilidad. Debido a ello, el criterio diagnóstico definitivo se realiza gracias a la biopsia de la glándula. Esta última prueba es invasiva y dolorosa, relacionada con infecciones, hemorragias, así como falsos negativos, por lo que el diagnóstico final suele confirmarse tras varias intervenciones de este carácter. Por estas razones, los métodos actuales de screening son insuficientes para un buen diagnóstico de CaP.

El objetivo de este estudio consiste en identificar biomarcadores proteicos o perfiles metabólicos, característicos de CaP desde el punto de vista diagnóstico y pronóstico. De esta manera, se podría desarrollar una tecnología transferible a uso clínico, que permita identificar CaP tempranamente y de modo no invasivo, con alta eficiencia y mínimo coste, y a su vez diferenciarla de otras patologías prostáticas.

Para ello, se utilizará la Espectrometría Raman, una técnica que estudia la dispersión de la luz en su interacción con la materia. Dependiendo de la naturaleza de las vibraciones moleculares se consigue obtener información de la estructura molecular, la composición y las interacciones intermoleculares. Sin embargo, la concentración de algunos de los metabolitos de las muestras está por debajo del límite de detección de la dispersión Raman. Por lo tanto, su análisis se acrecienta con métodos de amplificación como la dispersión Raman mejorada en la superficie (SERS). Dicha técnica amplifica las vibraciones moleculares gracias al uso de coloides metálicos (del tipo nanopartículas de Ag). Gracias a esta metodología podremos conseguir un fingerprinting metabólico de la muestra, es decir, la identificación global de todos los metabolitos detectables en ella. Esta información será usada estadísticamente para diferenciar sujetos sanos, sujetos con CaP, y sujetos con otras patologías prostáticas.

dianas 10(1) > Guerrero-Amelín y Mateos-Gómez

dianas | Vol 10 Num 1 | marzo 2021 | e202103a05

Estudio bibliográfico sobre la posible relación entre la regulación de la expresión de la ADN polimerasa theta y la desregulación metabólica en células tumorales.

Carolina Guerrero-Amelín, Pedro Antonio Mateos-Gómez

Universidad de Alcalá.

a. carolina.guerreroa@edu.uah.es  b. pedroantonio.mateos@uah.es

VI Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2021.
29 de marzo a 30 de abril, 2021. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Keywords: ADN polimerasa theta; cáncer; efecto Warburg; disfunción mitocondrial; PGC1 alpha

Abstract

El cáncer es una patología que presenta una gran relevancia en nuestros días. Se caracteriza por que las células tumorales presentan un metabolismo diferente al de las células normales, ya que llevan a cabo una glucólisis anaeróbica, incluso en condiciones de normoxia, llamada “efecto Warburg” o disfunción mitocondrial ya que no tiene lugar el ciclo de Krebs ni se emplea la cadena transportadora acoplada a la fosforilación oxidativa en la mitocondria. Sorprendentemente, este metabolismo característico de las células tumorales no es llevado a cabo por las células normales exceptuando las células del testículo, tejido placentario y linfocitos. Además, se ha observado que las células tumorales presentan un aumento en la expresión de Pol θ, una ADN polimerasa que actúa en la reparación alternativa de extremos no homólogos o alt-NHEJ, y que es considerada como diana terapéutica. La característica de esta reparación es que a pesar de que repara las roturas de doble cadena para evitar la muerte celular, presenta una tasa de mutación muy elevada, lo que puede otorgar a las células tumorales nuevas características para la supervivencia, proliferación y migración. En el efecto Warburg se observa una reordenación del ciclo glucolítico potenciado por factores como HIF-1 o c-MYC, favoreciendo la obtención de lactato, 2 ATP y fuente de carbono para obtener intermediarios metabólicos utilizados para crecer y multiplicarse. Como consecuencia de ello, se elevan los niveles de ROS que son contrarrestados por la activación de PGC-1 α y de las enzimas antioxidantes. Los ROS provocan daño en el ADN el cual tiene que ser reparado. En este estudio se plantea la idea de que el aumento en la expresión de Pol θ y por tanto la reparación por alt-NHEJ, podría estar inducida por el efecto Warburg, la regulación del mismo o por las consecuencias de este. La misma relación también podría observarse en las células normales que tienen elevada la expresión de Pol θ.

dianas 10(1) > Domínguez-Martín etal

dianas | Vol 10 Num 1 | marzo 2021 | e202103a04

Phytochemical and antitumoral activity studies of Plectranthus hadiensis (Forssk.) Schweinf. ex Sprenger aerial parts.

Eva María Domínguez-Martín, Epole Ntungwe, Catarina Teodosio, Vera Isca, Gabrielle Bangay, Ana María Díaz-Lanza, Patrícia Rijo

1. University of Alcalá de Henares, Faculty of Pharmacy, Department of Biomedical Sciences, Pharmacology Area (Pharmacognosy Laboratory), New antitumor compounds: Toxic action on leukemia cells research group. Ctra. A2, Km 33.100 – Campus Universitario, 28805. Alcalá de Henares, Madrid, Spain.  2. Universidade Lusófona’s Research Center for Biosciences & Health Technologies-CBIOS,Bio.Natural Lab. Campo Grande 376, 1749-024 Lisbon, Portugal.  3. University of Lisbon, Faculty of Pharmacy, Instituto de Investigação do Medicamento (iMed.ULisboa). 1649-003 Lisbon, Portugal.

a. evam.dominguez@uah.es  b. ana.diaz@uah.es  c. patricia.rijo@ulusofona.pt

VI Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2021.
29 de marzo a 30 de abril, 2021. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Keywords: Plectranthus; Lamiaceae; cancer; diterpenes; royleanones

Abstract

The Plectranthus genus belongs to the Lamiaceae family and consists of around 300 species distributed from Africa to Asia and Australia. Several studies have reported that Plectranthus species are rich in abietane-type diterpenes, such as royleanones, which are interesting in the treatment of various diseases. One of such species is Plectranthus hadiensis (Forssk.) Schweinf. ex Sprenger, which has been documented to be useful in several types of cancer (1). The objective of this work is to present the preliminary results of extraction, fractionation, isolation and bioactivity of the aerial parts of this plant. These data indicate a great difference between the acetonic extracts from leaves and those from stems, mainly in their content of 7a-acetoxy-6b-hydroxyroyleanone, which has cytotoxic properties (2,3). Currently, phytochemical studies are ongoing to elucidate the main abietanes responsible for the biological activity.

1. Schultz F, Anywar G, Wack B, Quave CL, Garbe LA. Ethnobotanical study of selected medicinal plants traditionally used in the rural Greater Mpigi region of Uganda. J Ethnopharmacol. 2020;256:112742.
2. Sitarek P, Toma M, Ntungwe E, Kowalczyk T, Skala E, Wieczfinska J, et al. Insight the Biological Activities of Selected Abietane Diterpenes Isolated from Plectranthus spp. Biomolecules. 2020;10(2):194.
3. Sliwinski T, Sitarek P, Skala E, Isca VMS, Synowiec E, Kowalczyk T, et al. Diterpenoids from Plectranthus spp. as Potential Chemotherapeutic Agents via Apoptosis. Pharmaceuticals. 2020;13(6):123.

Acknowlegments :This work was supported in part by FCT – Fundacão para a Ciência e Tecnologia grants PEst-OE/SAU/UI4013/2014, UID/DTP/04567/ 2016, UIDB/04567/2020 and UIDP/04567/2020. E.M.D-M gratefully acknowledges being the recipient of a predoctoral FPU 2019 fellowship from University of Alcalá.

dianas 10(1) > Carrión-Marchante etal

dianas | Vol 10 Num 1 | marzo 2021 | e202103a03

Aptámeros de DNA frente a la proteína quinasa VRK1 bloquean la proliferación celular en células MCF7 de cáncer de mama.

Rebeca Carrión-Marchante, Valerio Frezza, Ana Salgado-Figueroa, María Isabel Pérez-Morgado, María Elena Martín, Víctor Manuel González

IRYCIS.

a. rebecacm93@gmail.com

VI Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2021.
29 de marzo a 30 de abril, 2021. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: DNA aptamers; anticancer aptamers; VRK1; breast cancer; cell cycle

Resumen

La proteína VRK (vaccinia-related kinase) 1 es una serina/treonina quinasa que desempeña un papel muy importante, tanto en la respuesta al daño en el DNA, como en la progresión del ciclo celular, a través de la fosforilación de diversas proteínas implicadas en estos procesos. La sobreexpresión de VRK1 en diferentes tipos de cáncer se correlaciona con un peor pronóstico en esta enfermedad. Por ello, VRK1 podría ser considerada como una potencial diana terapéutica en oncología.En nuestro laboratorio se han seleccionado aptámeros que reconocen VRK1 con gran afinidad y sensibilidad, capaces de producir un bloqueo en la fase G1 del ciclo celular y de inducir apoptosis en líneas celulares de cáncer de mama. Estos resultados sugieren que los aptámeros seleccionados son inhibidores específicos de VRK1 que podrían ser usados en el tratamiento del cáncer.

dianas 10(1) > Guerrero-Amelín y Gonzalez-Billalabeitia

dianas | Vol 10 Num 1 | marzo 2021 | e202103a02

Uso de la técnica Droplet Digital PCR (ddPCR) en cáncer de próstata resistente a la castración mediante biopsia líquida.

Carolina Guerrero-Amelín, Enrique Gonzalez-Billalabeitia

Hospital 12 de Octubre.

a. carolina.guerreroa@edu.uah.es  b. enrique.gonzalezbilla@gmail.com

VI Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2021.
29 de marzo a 30 de abril, 2021. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Keywords: ddPCR; cáncer; próstata; biopsia líquida; Droplet digital PCR

Abstract

El cáncer de próstata es el segundo tipo de cáncer más frecuente entre los hombres. La identificación de las diversas alteraciones moleculares, ha permitido la aparición de nuevos biomarcadores para el diagnóstico, pronóstico y el tratamiento del cáncer en oncología clínica. De forma rutinaria se estudian muestras de tejido tumoral parafinadas, sin embargo, el estudio del ctDNA obtenido a partir de biopsias líquidas (principalmente sangre) requiere de un procedimiento de extracción mínimamente invasivo y de fácil obtención. Actualmente se utilizan varios métodos de estudio como la secuenciación de nueva generación (NGS) o la técnica de ddPCR, obteniendo esta última una mayor precisión y sensibilidad. Es por ello que se pretende incorporar la ddPCR en la clínica tanto para el estudio de los diversos biomarcadores como para el diagnóstico, pronóstico, tratamiento y seguimiento de la enfermedad.