dianas 9(1) > Mora-Rodríguez etal

dianas | Vol 9 Num 1 | marzo 2020 | e202003a08

Influencia de las principales alteraciones genéticas en cáncer de próstata en la reparación del DNA.

José María Mora-Rodríguez^a, Irene de Miguel, Alicia Bort, Belén Sánchez Gómez, Inés Díaz-Laviada, Pedro Antonio Mateos-Gómez

Departamento de Biología de Sistemas. Universidad de Alcalá. Campus Universitario - C/ 19, Av. de Madrid, Km 33,600, 28871 Alcalá de Henares, Madrid.

a. josemmoraro@gmail.com

V Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2020.
16-18 de marzo, 2020. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: POLQ; Polθ; Alternative-NHEJ; homologous recombination; CRISPR/Cas9 targeting

Resumen

Procesos celulares como la replicación y transcripción del DNA y la exposición a diversos factores ambientales químicos y físicos inducen lesiones en el DNA. Dentro de estas lesiones, las más peligrosas son las roturas de doble cadena (DSB), en las que ambas cadenas de DNA se rompen pudiendo provocar inestabilidad genómica y alteraciones genéticas cuando se reparan incorrectamente. Existen tres vías de reparación de DSB: la recombinación homóloga (HR), la unión de extremos no homólogos clásica o Classical Non-Homologous end-joining (C-NHEJ) y la unión de extremos no homólogos alternativa o Alternative Non-Homologous end-joining (A-NHEJ). Este último mecanismo suele usar micro-homologías para unir los extremos de la rotura, lo que aumenta en gran medida la probabilidad de error. Una proteína fundamental en el mecanismo de A-NHEJ es la polimerasa Theta (Polθ) codificada por POLQ. Resultados previos han demostrado que Polθ podría ser una nueva diana terapéutica en tumores de mama y ovario. En este trabajo estudiaremos la actividad de Polθ en cáncer de próstata (PC), el cual es uno de los más comunes y la quinta causa de muerte por cáncer en varones. Algunas de las alteraciones genéticas más comunes en tumores primarios de PC son la fusión de un gen regulado por andrógenos y el factor de transcripción ERG (TMPRSS2-ERG), y mutaciones en el gen SPOP (proteína POZ tipo Speckle), que está mutado en el 10-15% de los PCs. En la mayoría de los PCs avanzados, los genes más alterados son PTEN (homólogo de fosfatasa y tensina) que está implicado en la inhibición de la vía de supervivencia PI3K-AKT-mTOR; Retinoblastoma 1 (RB1) y N-Myc, los cuales conducen a la adquisición de resistencia a los tratamientos actuales. Todas estas alteraciones podrían afectar a la elección del mecanismo de reparación de DSB. En este estudio, para poder cuantificar la reparación mediada por el A-NHEJ y la influencia de estas alteraciones genéticas, utilizaremos la nucleasa Cas9 y un plásmido reportero. Éste es una construcción lentiviral que contiene el sitio de corte para Cas9 y así poder introducir un DSB, y que permite cuantificar el uso de A-NHEJ mediante la expresión de GFP. En consecuencia, cuantificar la actividad de Polθ. Por tanto, el objetivo de este trabajo es estudiar cómo las alteraciones genéticas anteriormente mencionadas influyen en la reparación de DSB por A-NHEJ.