dianas 8(1) > Errazquin etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a33

Generación de herramientas de utilidad preclínica para el estudio del cáncer oral en pacientes con anemia de Fanconi.

Ricardo Errazquin^a, Carmen Segrelles, Ramón García-Escudero

CIEMAT-Instituto de Investigación Hospital 12 de Octubre.

a. ricardo.errazquinciudad@externos.ciemat.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A3, Mixta.

Palabras clave: Anemia de Fanconi; FANCA; Carcinoma escamoso de cabeza y cuello; CRISPR/Cas9;

Resumen

La anemia de Fanconi (AF) es una enfermedad rara, genética recesiva, producida por mutaciones en genes de la ruta de Fanconi, implicada en reparación de ADN. La AF se caracteriza por fallo en médula ósea, malformaciones y alta incidencia de carcinomas escamosos de cabeza y cuello (CECyC). El CECyC en pacientes AF tiene mal pronóstico, y los tratamientos convencionales (quimio/radioterapia) presentan una elevada toxicidad en estos pacientes. El principal objetivo de este trabajo es generar herramientas de utilidad preclínica para obtener tratamientos efectivos y de baja toxicidad. Hemos observado que la línea de CECyC VU1365 derivada de un paciente AF con mutación en FANCA (el gen más frecuentemente alterado en AF), aunque no presenta diferencias en proliferación respecto a una versión corregida (VU1365+FANCA), si tiene una mayor capacidad de migración y una mayor sensibilidad a tratamiento con agentes genotóxicos (mitomicina-C y cisplatino). Estas diferencias pueden estar asociadas a distintos perfiles de expresión génica global, lo que permitiría la predicción de terapias efectivas mediante herramientas in silico. Por otro lado, se ha utilizado la tecnología CRISPR/Cas9 para introducir mutaciones inactivantes en FANCA en la línea celular Cal27, derivada de un CECyC de un paciente sin AF. Hemos obtenido exitosamente clones editados de Cal27 que no expresan proteína FANCA. Este resultado facilita la generación de nuevas líneas celulares de CECyC editadas para el análisis fenotípico y de expresión génica.

dianas 8(1) > Miguélez

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a32

Aproximación al estudio de las alteraciones moleculares responsables del desarrollo del cáncer de próstata resistente a la castración.

Laura Miguélez

lmiguelez.uah@gmail.com

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A3, Mixta.

Resumen

El cáncer de próstata (CP) es el segundo cáncer más frecuente en los hombres a nivel mundial. La mayoría de los tumores de próstata son dependientes de andrógenos, por lo que el principal tratamiento es la deprivación androgénica. El RA es un factor de transcripción que regula la expresión de genes implicados en la diferenciación de la próstata y en la progresión del ciclo celular. La respuesta al bloqueo hormonal es limitada y con el tiempo en un gran número de casos el tumor progresa a un fenotipo mucho más agresivo denominado CP resistente a la castración (CPRC). Entre los mecanismos moleculares implicados en este proceso está la expresión de variantes de splicing del RA (ARV7) que carecen del dominio de unión a ligando y que inducen un perfil de expresión diferente al del RA. Esto puede ser debido a que ambos interaccionan con diferentes proteínas como mecanismo para regular la expresión génica. Otro mecanismo implicado en el CRPC es la fosforilación y activación del RA por vías de transducción de señales alternativas. En este sentido, en CP se produce una disminución de la expresión de la tirosina fosfatasa SHP-1, una de las responsables de la regulación de estas vías de señalización. Por ello, el objetivo de este trabajo fue identificar las proteínas que interaccionan con SHP-1, AR y ARV7 en células de CP sensible y resistente al tratamiento hormonal. La comparación de las proteínas que interaccionan con RA, ARV7 ayudará a identificar las proteínas responsables del diferente perfil de expresión regulado por ambos receptores y las que interaccionan con SHP-1 a entender los mecanismos por lo que se activa el RA en ausencia de ligando. Para ello, hemos puesto a punto un sistema que permite identificar interacciones proteína-proteína in vivo, denominado BioID. Este método consiste en generar una proteína de fusión formada por nuestra proteína de interés y una biotina ligasa promiscua (BirA) que biotinila proteínas por proximidad. Estas construcciones las hemos generado en un vector de expresión y se han transfectado en células de CP sensibles y resistentes a los tratamientos hormonales. En una siguiente fase, se identificarán mediante espectrometría de masas las proteínas biotiniladas que son candidatas a interaccionar con nuestra proteína de interés. Los resultados obtenidos nos permitirán definir los mecanismos moleculares responsables del progreso del CP a la fase resistente al bloqueo hormonal e identificar nuevas dianas terapéuticas para esta fase del CP.

dianas 8(1) > Tosat-Bitrián etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a31

Specific biosensors in drug discovery for Amyotrophic Lateral Sclerosis.

Carlota Tosat-Bitrián, Ana Martínez, Valle Palomo

Centro de Investigaciones Biológicas, CSIC.

a. carlota.tosat@cib.csic.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A3, Mixta..

Palabras clave: quantum dots; ELA; patología molecular; célula única; TDP-43;

Resumen

Las enfermedades neurodegenerativas constituyen un problema crítico tanto médico, social como económico en todo el mundo. A pesar de los esfuerzos por comprender mejor las enfermedades neurodegenerativas, hay una falta de conocimiento sobre su patología molecular la cual es crucial para desarrollar nuevos tratamientos efectivos. La esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa caracterizada por la muerte de las motoneuronas (MN) lo cual produce una parálisis progresiva. El mecanismo subyacente a dicha muerte selectiva de las motoneuronas todavía no se ha caracterizado, convirtiéndose en una diana crucial para el desarrollo de fármacos innovadores y efectivos. La técnica de perfil molecular es una tecnología innovadora y potente para estudiar y comprender las rutas y vías de señalización que subyacen los procesos tanto patológicos como fisiológicos. Como herramienta para aplicar esta tecnología, se propone la utilización de los quantum dots (QDs). Los QD son nanopartículas formadas por un núcleo de CdSe y una cubierta de ZnS que ofrecen propiedades fotoluminiscentes únicas. Presentan una alta fotoestabilidad, altos coeficientes de extinción, amplios espectros de absorción pero estrechos de emisión lo cual permite una detección más sensible así como ensayos multiplex. Los QDs han sido conjugados eficientemente con anticuerpos monoclonales (mAB) formando sondas QD-AB que pueden utilizarse en técnicas de inmunofluroescencia implementando un inmunoensayo multiplex basado en QDs. Aplicando esta tecnología, diferentes dianas clave de la ELA como TDP-43, p-TDP-43 y CK1 pueden ser analizadas a nivel de célula única en modelos humanos como linfoblastos y células madre pluripotenciales inducidas de pacientes de ELA El propósito científico de este proyecto es contribuir aún más a comprender la patología molecular de la ELA, encontrando patrones moleculares en los pacientes, detectando así las dianas moleculares de estas enfermedades; y estudiar los cambios moleculares que se producen en las proteínas diana clave tras tratamiento farmacológico ayudando a seleccionar posibles candidatos terapéuticos.