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dianas 8 (1) González-cofrade etal 2019 Novel anti-inflammatory agents via inhibition of NF-kappaB and/or Inflammasome pathways: a series of hispanolone-derived diterpenes.

dianas 8(1) > González-cofrade etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903p07

Novel anti-inflammatory agents via inhibition of NF-kappaB and/or Inflammasome pathways: a series of hispanolone-derived diterpenes.

Departamento de Farmacología, Farmacognosia y Botánica. Facultad de Farmacia, Universidad Complutense de Madrid.

alagonz11@ucm.es; lauragoncof@gmail.com

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España
Sesión de paneles.

Abstract

Inflammation is a crucial host response triggered by invading pathogens and injured tissue. Natural products have played a significant role in human health as a source of new drugs to prevent and treat inflammatory conditions. Diterpenes are bioactive natural products with great therapeutic potential and are considered very promising starting points for the development of new therapeutic agents. In this study, a series of seventeen novel hispanolone derivatives (N1-N17) were synthesized and evaluated for potential anti-inflammatory activity in J774A.1 macrophages. We focused on their potential as inhibitors of classical inflammatory pathways (NF-κB/MAPKs) and/or NLRP3 inflammasome activation. All compounds except N2 and N5 were non-cytotoxic, as revealed the MTT assay. To evaluate the effects of diterpenes on NF-κB pathway, macrophages were activated with lipopolysaccharide (LPS) in the absence or presence of these compounds. Inhibitory effects of the non-toxic derivatives on nitric oxide (NO) production were evaluated. Hispanolone derivatives N1 and N12 were the most active compounds (IC50 in the range 10-20 µM) so they were selected for further evaluation. NOS-2 and COX-2 expression were significantly inhibited, as observed by western blot. Moreover, the phosphorylation of mitogen-activated protein kinases (MAPKs) ERK1/2, p38 and JNK was also reduced by pre-incubation with N1 and N12. We also investigated their potential as regulators of NLRP3 inflammasome. Cell treatment with diterpenes N12, N13, N16 and N17 at 20 µM significantly reduced IL-1β secretion in LPS/ATP or LPS/Nigericin-stimulated macrophages. Western blot analyses also confirmed that these compounds inhibited IL-1β and cleaved caspase-1 protein expression. In conclusion, these results show the promising anti-inflammatory effects of some hispanolone derivatives, in particular N12, acting on a dual level. This diterpene not only inhibits NF-κB/MAPKs signalling pathways, but also regulates inflammasome activation.

Citation: González-cofrade, L; Cuadrado, I; Estévez-Braun, A; Hortelano, S; Las Heras, B. (2019) Novel anti-inflammatory agents via inhibition of NF-kappaB and/or Inflammasome pathways: a series of hispanolone-derived diterpenes. Proceedings of the IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019. 20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión de paneles. dianas 8 (1): e201903p07. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201903p07 http://www3.uah.es/dianas?e201903p07. URI http://hdl.handle.net/10017/15181. DOI https://doi.org/10.37536/DIANAS.2019.8.1.43

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dianas 8 (1) Serna-Blasco etal 2019 Warburg metabolic shift induced by vitamin C in KRAS mutant CRC.

dianas 8(1) > Serna-Blasco etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903p06

Warburg metabolic shift induced by vitamin C in KRAS mutant CRC.

Fundación Jiménez Díaz.

aroberto.sb.93@gmail.com; roberto.serna@quironsalud.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España
Sesión de paneles.

Citation: Serna-Blasco, Roberto; Aguilera-Martinez, Óscar; García-Foncillas, Jesús (2019) Warburg metabolic shift induced by vitamin C in KRAS mutant CRC. Proceedings of the IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019. 20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión de paneles. dianas 8 (1): e201903p06. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201903p06 http://www3.uah.es/dianas?e201903p06. URI http://hdl.handle.net/10017/15181. DOI https://doi.org/10.37536/DIANAS.2019.8.1.42

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dianas 8 (1) Sánchez-Baltasar etal 2019 Breast cancer animal models: Rasa1 knockout.

dianas 8(1) > Sánchez-Baltasar etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903p05

Breast cancer animal models: Rasa1 knockout.

CIEMAT-Instituto de Investigación Hospital 12 de Octubre.

araquel.sanchez@externos.ciemat.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España
Sesión de paneles.

Abstract

El cáncer de mama es el tipo de tumor que ocupa el primer puesto en incidencia en la población femenina mundial y es uno de los que mayor mortalidad causa. A pesar de que es frecuente encontrar mutaciones en los genes clásicos de la familia de Ras en otros tipos tumorales, no lo es en cáncer de mama, aunque la vía se encuentra frecuentemente sobreactivada en algunos subtipos como los triple negativos o basales. Estudios previos en nuestro laboratorio sugieren que esto puede deberse a la pérdida alélica de RASA1 en concomitancia con mutaciones en el gen TP53, eventos frecuentes en estos subtipos tumorales que son los más agresivos y de peor pronóstico. Por ello, hemos decidido llevar a cabo un estudio en profundidad de los mecanismos moleculares que llevan al desarrollo y/o progresión del cáncer de mama como consecuencia de la alteración de estos dos genes. En consecuencia, se planteó la generación de modelos animales deficientes en Rasa1 en combinación con mutaciones en Trp53 con el objetivo de confirmar la colaboración de la activación de la vía de Ras y p53 como causante de cáncer de mama. Para el desarrollo de estos modelos animales modificados genéticamente se empleó la tecnología CRISPR/Cas9. Para ello, se diseñó una pareja de guías específicas para el gen Rasa1 con el objetivo de utilizarlas mediante dos aproximaciones diferentes. En primer lugar, con el objetivo futuro de realizar el aloinjerto de células de glándula mamaria electroporadas con las guías diseñadas para Rasa1 (e infectadas con un vector lentiviral para la sobreexpresión de una forma mutada de p53), se realizó una puesta a punto extrayendo y purificando estas células de hembras donadoras e infectándolas con un vector lentiviral que expresa la proteína GFP para trasplantarlas en la almohadilla grasa desepitelizada de hembras receptoras. Por otro lado, se empleó la tecnología CRISPR/Cas9 para realizar la edición del gen Rasa1 en estadio embrionario. Las guías específicas para este gen se introdujeron en los zigotos junto con la Cas9 en forma de ribononucleoproteína mediante electroporación por dos métodos: iGonad (“Oviductal Nucleic Acids Delivery”) o ZEN (“Zygote Electroporation of Nucleases”). En el modelo de aloinjerto se observó una reconstitución del epitelio de la glándula mamaria con las células trasplantadas a 2 meses post-trasplante, verificando la utilidad de esta aproximación para la generación de nuestro modelo. Respecto a la electroporación de los zigotos, aunque con el método iGonad no se vio edición en ninguno de los casos, con el método ZEN se consiguió un 75% de edición, donde en más del 80% de estos animales se observó un cambio de expresión de la proteína RASA1. En conclusión, tanto la aproximación del aloinjerto en la glándula mamaria como la utilización del método ZEN para la generación de modelos animales modificados genéticamente con la tecnología CRISPR/Cas9 para el gen Rasa1, pueden ser una buena aproximación para el estudio de la implicación de este gen en el cáncer de mama.

Citation: Sánchez-Baltasar, Raquel; Page, Angustias; Ojeda-Pérez, Isabel; Gil-Pitarch, Claudia; Navarro, Manuel; Ramírez, Ángel (2019) Breast cancer animal models: Rasa1 knockout. Proceedings of the IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019. 20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión de paneles. dianas 8 (1): e201903p05. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201903p05 http://www3.uah.es/dianas?e201903p05. URI http://hdl.handle.net/10017/15181. DOI https://doi.org/10.37536/DIANAS.2019.8.1.41

Copyright: © Sánchez-Baltasar R, Page A, Ojeda-Pérez I, Gil-Pitarch C, Navarro M, Ramírez. Some rights reserved. This is an open-access work licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 8 (1) García-García etal 2019 Signos de envejecimiento acelerado en los ratones transgénicos que sobreexpresan IKKα en el núcleo.

dianas 8(1) > García-García etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903p04

Signos de envejecimiento acelerado en los ratones transgénicos que sobreexpresan IKKα en el núcleo.

CIEMAT-CIBERONC.

averoga03@ucm.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España
Sesión de paneles.

Abstract

En nuestro grupo hemos generado ratones transgénicos que, bajo el control de los elementos reguladores de la queratina K5, expresan la proteína IKKα humana en el núcleo de las células de la capa basal de los epitelios estratificados de la piel y de otros órganos internos (ratones que denominamos K5-N-IKKα). El objetivo de este trabajo ha sido caracterizar el fenotipo que presentan estos ratones en estos tejidos como consecuencia de la expresión del transgén. Se han realizado estudios histológicos e inmunohistoquimicos de diferentes tejidos que han mostrado que la sobreactivación de IKKα en el núcleo provoca un fenotipo de envejecimiento prematuro en piel, caracterizado por la presencia de atrofia epidérmica junto a áreas de hiperplasia papilomatosa (dando el aspecto de arrugas), reducción del panículo adiposo y atipia de las células basales (considerada como signo de premalignidad); en la dermis se observa además inflamación con abundantes mastocitos, así como focos de inflamación liquenoide. Adicionalmente, hemos detectado el desarrollo de tumores espontáneos de diverso origen, principalmente carcinomas escamosos de piel, adenocarcinomas de pulmón y linfomas no Hodgkin de células B. Hemos obtenido los mismos resultados cuando se expresa N-IKKα en ratones deficientes en IKKα. En conjunto, las alteraciones que desarrollan los ratones que sobreexpresan IKKα en el núcleo son semejantes a las que se observan en la vejez en humanos.

Citation: García-García, Verónica; Alameda, Josefa P.; Sánchez-Sierra, Federico; Hernández, Pilar; García, Rosa A.; Page, Angustias; Casanova, M. L. (2019) Signos de envejecimiento acelerado en los ratones transgénicos que sobreexpresan IKKα en el núcleo. Proceedings of the IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019. 20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión de paneles. dianas 8 (1): e201903p04. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201903p04 http://www3.uah.es/dianas?e201903p04. URI http://hdl.handle.net/10017/15181. DOI https://doi.org/10.37536/DIANAS.2019.8.1.40

Copyright: © García-García V, Alameda JP, Sánchez-Sierra F, Hernández P, García RA, Page A, Casanova ML. Some rights reserved. This is an open-access work licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 8 (1) Lodewijk etal 2019 Prognostic and predictive immune gene signatures and correlation with homologous recombination deficiency in high grade serous ovarian cancer.

dianas 8(1) > Lodewijk etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903p03

Prognostic and predictive immune gene signatures and correlation with homologous recombination deficiency in high grade serous ovarian cancer.

CIEMAT-IMAS12.

airisadriana.lodewijk@externos.ciemat.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España
Sesión de paneles.

Abstract

The majority of patients with epithelial ovarian, fallopian tube, or primary peritoneal cancer presents with advanced malignancy (stage III or IV disease). Standard treatment consists of primary debulking surgery (PDS) followed by chemotherapy, whereas neoadjuvant chemotherapy (NACT) can be given to patients who have unresectable disease or represent poor surgical candidates. Multiple studies have indicated that survival after NACT approximates that of suboptimal PDS. Approximately 50% of high grade serous ovarian cancers (HGSOCs) display genetic and epigenetic alterations in genes of the homologous recombination (HR) DNA repair pathway, mostly in BRCA1 and BRCA2 genes. A recent study demonstrated that tumors with higher neoantigen load show increased expression of immune genes related to tumor cytotoxicity. Moreover, immune checkpoint inhibitors (such as PD-1 and PD-L1) have shown remarkable efficacy against various hypermutated cancers. This might be due to the increased amount of tumor-specific neoantigens in hypermutated lesions which stimulates the recruitment of an elevated number of tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) and is counterbalanced by the increased expression of immune checkpoints. Additionally, BRCA1/2-mutated tumors have been found to show a significantly increased amount of CD3+ and CD8+ TILs, and enhanced expression of PD-1 and PD-L1 in HR deficient tumor-associated immune cells compared to HR proficient tumors. Taken together, there might be a link between BRCA1/2-mutation status and immunogenicity, and BRCA1/2-mutated HGSOCs might be more sensitive to immune checkpoint inhibitors compared to HR-proficient HGSOCs. Accordingly, this project is focused on the study of prognostic and predictive immune gene signatures and correlation with homologous recombination deficiency in HGSOC, using a combination of Immunohistochemistry, Nanostring Immuno-Oncology Assay and targeted Sequencing using Foundation one technologies. For this study, we intend to use a patient population consisting of 90 matched samples HGSOC (n=45 pts), treated with neoadjuvant induction chemotherapy (carboplatin and paclitaxel standard dose). The matched samples will be baseline biopsy and samples from Interval Debulking Surgery (IDS). We hypothesize that homologous recombination deficiency in high grade serous ovarian cancer results in a higher tumor-specific neoantigen load, and, therefore, increased tumor-infiltrating lymphocytes as well as increased expression of the immune checkpoint genes.

Citation: Lodewijk, Iris; Dueñas, Marta; Suárez-Cabrera, Cristian; García-Martín, Rosa; Manso, Luis; Paramio, Jesús M. (2019) Prognostic and predictive immune gene signatures and correlation with homologous recombination deficiency in high grade serous ovarian cancer. Proceedings of the IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019. 20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión de paneles. dianas 8 (1): e201903p03. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201903p03 http://www3.uah.es/dianas?e201903p03. URI http://hdl.handle.net/10017/15181. DOI https://doi.org/10.37536/DIANAS.2019.8.1.39

Copyright: © Lodewijk I, Dueñas M, Suárez-Cabrera C, García-Martín R, Manso L, Paramio JM. Some rights reserved. This is an open-access work licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 8 (1) García-Pastor etal 2019 Papel de la PGE2 en la muerte inducida por hipoxia de células proximales tubulares.

dianas 8(1) > García-Pastor etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903p02

Papel de la PGE2 en la muerte inducida por hipoxia de células proximales tubulares.

Universidad de Alcalá.

acoralgarciapastor@gmail.com  bselma.benito@uah.es  cjavier.lucio@uah.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España
Sesión de paneles.

Resumen

La hipoxia tisular es uno de los factores implicados en el desarrollo tanto de lesión renal aguda como crónica. Las células proximales tubulares (CPT) son particularmente susceptibles a la disponibilidad de oxígeno y se ha demostrado que la hipoxia puede llegar a inducir su muerte. Durante la hipoxia se produce un acumulo del factor inducible por hipoxia-1 (HIF-1α), que activa la transcripción de sus genes diana, entre los que se encuentra la ciclooxigenasa 2 (COX-2). COX-2 participa en la síntesis de diferentes tipos de prostaglandinas (PG), como PGE2, que posteriormente se une a los receptores EP y activa diferentes vías de señalización. Estudios previos de nuestro laboratorio han demostrado que PGE2 intracelular (iPGE2) media la apoptosis inducida por cisplatino en CPT, que puede ser prevenida al inhibir el transportador de PGE2 al interior celular con bromosulfoftaleina y, otros autores, también han demostrado su implicación en diferentes modelos de muerte celular. En este trabajo analizamos el papel que desempeñaba la vía COX-2/iPGE2/receptores EP en la muerte por hipoxia. Para ello, inhibimos la vía mediante inhibidores de COX-2 y del trasportador de prostaglandina PGT (transportador responsable del aumento de los niveles intracelulares de iPGE2 gracias a la captura por la célula de PGE2 desde el medio extracelular), así como antagonistas de los receptores EP. Observamos que, en todos los casos, se produjo una reducción significativa de la apoptosis celular. Estos resultados indicaron que la vía COX-2/iPGE2/receptores EP estaba implicada en la muerte inducida por hipoxia en células CPT. Estos resultados sugieren que los receptores EP intracelulares median la muerte por apoptosis inducida por hipoxia de las células proximales tubulares.
En conclusión, nuestro trabajo sugiere que el transportador de captación de PGE2 puede ser una buena diana terapéutica para la prevención de la muerte de CPT inducida por hipoxia.

Cita: García-Pastor, Coral; Benito-Martínez, Selma; Fernández-Martínez, Ana; Lucio-Cazaña, Javier (2019) Papel de la PGE2 en la muerte inducida por hipoxia de células proximales tubulares. Actas del IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019. 20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión de paneles. dianas 8 (1): e201903p02. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201903p02 http://www3.uah.es/dianas?e201903p02. URI http://hdl.handle.net/10017/15181. DOI https://doi.org/10.37536/DIANAS.2019.8.1.38

Copyright: © García-Pastor C, Benito-Martínez S, Fernández-Martínez A, Lucio-Cazaña J. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 8 (1) Sánchez etal 2019 La combinación de docetaxel y capsaicina inhibe sinérgicamente el crecimiento de células de cáncer de próstata (comunicación).

dianas 8(1) > Sánchez etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a24

La combinación de docetaxel y capsaicina inhibe sinérgicamente el crecimiento de células de cáncer de próstata (comunicación).

abelensg.88@gmail.com

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Resumen

La quimioterapia actual para el cáncer de próstata resistente a la castración se basa en compuestos derivados de taxanos como el docetaxel. Sin embargo, en ocasiones, la aparición de efectos secundarios tóxicos y resistencia limita el beneficio terapéutico, siendo la principal preocupación en el tratamiento del cáncer de próstata. Las terapias combinadas en muchos casos mejoran la eficacia del fármaco y retrasan la aparición de efectos no deseados, lo que constituye una alternativa para el tratamiento del cáncer de próstata resistente a la castración. En este estudio, comprobamos la eficacia del tratamiento combinado de docetaxel y capsaicina, el compuesto responsable del sabor picante de los pimientos, en la proliferación de células de cáncer de próstata. Los resultados obtenidos mostraron que el tratamiento combinado de docetaxel y capsaicina inhibió sinérgicamente el crecimiento de las células LNCaP y PC3, con un índice de combinación inferior a 1 para la mayoría de las combinaciones probadas. Además, el tratamiento combinado disminuyó notablemente la fosforilación de Akt y de sus dianas mTOR y S6, situadas por debajo en su cascada de transducción. Por otro lado, la disminución de la expresión de Akt impidió el efecto antiproliferativo del docetaxel, mientras que potenció el de la capsaicina. Todo esto sugiere que el efecto antiproliferativo sinérgico podría atribuirse a la inhibición de la vía de señalización PI3K/Akt/mTOR. A su vez, los experimentos in vivo confirmaron el efecto sinérgico del docetaxel y la capsaicina para reducir el crecimiento tumoral de células PC3 en ratones inmunodeficientes. En conclusión, nuestros resultados indican que el tratamiento combinado de docetaxel y capsaicina constituye un enfoque terapéutico relevante para el tratamiento del cáncer de próstata.

Cita: Sánchez, Belén G.; Bort, Alicia; de Miguel, Irene; Mateos-Gómez, Pedro A.; Rodríguez-Henche, Nieves; Díaz-Laviada, Inés (2019) La combinación de docetaxel y capsaicina inhibe sinérgicamente el crecimiento de células de cáncer de próstata (comunicación). Actas del IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019. 20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. dianas 8 (1): e201903a24. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201903a24 http://www3.uah.es/dianas?e201903a24. URI http://hdl.handle.net/10017/15181. DOI https://doi.org/10.37536/DIANAS.2019.8.1.12

Copyright: © Sánchez BG, Bort A, de-Miguel I, Mateos-Gómez PA, Rodríguez-Henche N, Díaz-Laviada I. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 8 (1) Díaz-Gago etal 2019 Inhibición de la β-oxidación de ácidos grasos como tratamiento en células tumorales tiroideas que expresan V600EBRAF.

dianas 8(1) > Díaz-Gago etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a23

Inhibición de la β-oxidación de ácidos grasos como tratamiento en células tumorales tiroideas que expresan V600EBRAF

asergio.diazgago@edu.uah.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A2, Cáncer.

Resumen

El cáncer de tiroides es la patología más común del sistema endocrino y se estima que representa aproximadamente el 3% de los cánceres diagnosticados en EE.UU. El subtipo de cáncer de tiroides más agresivo es el carcinoma anaplásico tiroideo (ATC). Una mutación frecuentemente observada en los ATC es V600EBRAF, la cual provoca la activación constitutiva de la quinasa, favoreciendo la progresión tumoral. La inhibición de V600EBRAF provoca resistencias al tratamiento, por lo que son necesarias nuevas terapias para el tratamiento de tumores con esta mutación. Puesto que las células tumorales dependen en gran medida del metabolismo lipídico para satisfacer sus requerimientos proliferativos y energéticos, su modulación ofrece una buena opción para el desarrollo de terapias. En concreto, la inhibición de rutas metabólicas, como la oxidación de ácidos grasos tiene efectos antiproliferativos. Por ello nuestro objetivo es determinar la dependencia que tienen las células BHT101, derivadas de ATC y que expresan V600EBRAF, de la oxidación de ácidos grasos para su supervivencia, así como los cambios en las proteínas AMPK y mTORC1, dos reguladores maestros del metabolismo celular. Nuestros resultados demuestran que las células derivadas de carcinoma anaplásico tiroideo dependen de la oxidación de ácidos grasos para la supervivencia celular, debido a que el etomoxir, un inhibidor de la CPT1, provoca un descenso en la viabilidad, que se acompaña de la activación de AMPK y la inhibición de mTORC1. Además, observamos que la inhibición de la degradación de los ácidos grasos provoca un aumento en la producción de lactato, lo que sugiere que está aumentando el flujo glucolítico como compensación ante la pérdida de los ácidos grasos como sustrato energético. Por último, destacamos la terapia combinada de la inhibición de V600EBRAF y de la β-oxidación como una prometedora forma de tratamiento para los tumores que presentan dicha mutación, ya que el tratamiento combinado del PLX4720 con el etomoxir provoca un efecto antiproliferativo mayor tanto en viabilidad como en apoptosis y en la activación de AMPK, que dichos tratamientos por separado.

Cita: Díaz Gago, Sergio; Gallego Tamayo, Beatriz; Chiloeches Gálvez, Antonio (2019) Inhibición de la β-oxidación de ácidos grasos como tratamiento en células tumorales tiroideas que expresan V600EBRAF. Actas del IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019. 20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión A2, Cáncer. dianas 8 (1): e201903a23. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201903a23 http://www3.uah.es/dianas?e201903a23. URI http://hdl.handle.net/10017/15181. DOI https://doi.org/10.37536/DIANAS.2019.8.1.11

Copyright: © Díaz-Gago S, Gallego-Tamayo B, Chiloeches-Gálvez A. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 8 (1) Munera-Maravilla etal 2019 Improving immunotherapy through chromatin remodelers inhibitors in bladder cancer.

dianas 8(1) > Munera-Maravilla etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a22

Improving immunotherapy through chromatin remodelers inhibitors in bladder cancer.

Centro de Investigaciones Energéticas, Medioambientales y Tecnológicas (CIEMAT) Av. Complutense, 40, 28040 Madrid.

aester.munera@ciemat.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A2, Cáncer.

Abstract

Bladder cancer (BC) is a common neoplasm which is lethal in its advanced muscular invasive phase and given the very limited therapeutic advances in the field, is in urgent need of new treatments. Recent molecular characterization of BC has defined new genetic and epigenetic drivers of the disease and potential new targets. The introduction of immune checkpoint inhibitors in BC has shown remarkable efficacy but only in a limited fraction of patients. Here, we show that in human BC high expression of G9a (EHMT2), a H3K9 methyltransferase, is associated with poor clinical outcome and that the targeting of G9a/DNMT methyltransferase activity with a novel, reversible, potent and dual inhibitor (CM-272) induces apoptosis and immunogenic cell death. In vivo, CM-272 alone and particularly in combination with cisplatin (CDDP) improves survival in xenograft models of BC. Using an immunocompetent quadruple (PtenF/F; Trp53F/F; Rb1F/F;Rbl1-/-) knockout transgenic mouse model of highly aggressive metastatic muscle-invasive BC, we demonstrate that treatment with CM-272 and CDDP results in significant regression of tumors and metastases. The anti-tumor effect is significantly improved when CM-272 is combined with anti-PD-L1, even in the absence of CDDP. These effects are associated with an in vivo activation of an endogenous antitumor immune response and immunogenic cell death with the conversion of a cold immune tumor into a hot tumor. Finally, in a series of BC patients treated with PD1 inhibitors, we show that increased levels of G9a and H3K9me2 are associated with tumor resistance, suggesting that expression of G9a may be a biomarker of response to immunotherapy. In summary, these findings support new and promising opportunities for the treatment of BC patients using a combination of epigenetic inhibitors and immune checkpoint blockade.

Citation: Munera-Maravilla, Ester; Segovia, Cristina; San José-Enériz, Edurne; Martínez-Fernández, Mónica; Garate, Leire; Miranda, Estíbaliz; Vilas-Zornoza, Amaia; Lodewijk, Iris; Rubio, Carolina; Segrelles, Carmen; Vitores Valcárcel, Luis; Rabal, Obdulia; Casares, Noelia; Bernardini, Alejandra; Suarez-Cabrera, Cristian; López-Calderón, Fernando F.; Fortes, Puri; Casado, José A.; Dueñas, Marta; Villacampa, Felipe; Lasarte, Juan José; Guerrero, Felix; de Velasco, Guillermo; Oyarzabal, Julen; Castellano, Daniel; Agirre, Xabier; Prósper, Felipe; Paramio, Jesús M. (2019) Improving immunotherapy through chromatin remodelers inhibitors in bladder cancer. Proceedings of the IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019. 20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión A2, Cáncer. dianas 8 (1): e201903a22. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201903a22 http://www3.uah.es/dianas?e201903a22. URI http://hdl.handle.net/10017/15181. DOI https://doi.org/10.37536/DIANAS.2019.8.1.10

Copyright: © Munera-Maravilla E, Segovia C, San-José-Enériz E, Martínez-Fernández M, Garate L, Miranda E, Vilas-Zornoza A, Lodewijk I, Rubio C, Segrelles C, Vitores-Valcárcel L, Rabal O, Casares N, Bernardini A, Suarez-Cabrera C, López-Calderón FF, Fortes P, Casado JA, Dueñas M, Villacampa F, Lasarte JJ, Guerrero F, de-Velasco G, Oyarzabal J, Castellano D, Agirre X, Prósper F, Paramio JM. Some rights reserved. This is an open-access work licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 8 (1) Gallego-Tamayo etal 2019 El bloqueo de la glucolisis colabora con la eficacia terapéutica de la inhibición de V600EBRAF en células tumorales tiroideas.

dianas 8(1) > Gallego-Tamayo etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a21

El bloqueo de la glucolisis colabora con la eficacia terapéutica de la inhibición de V600EBRAF en células tumorales tiroideas

abgallego28@gmail.com

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A2, Cáncer.

Resumen

El cáncer de tiroides es el tumor endocrino más común y, aunque es altamente curativo, presenta una elevada tasa de recurrencia [1]. Una de las mutaciones más frecuentes en este tipo de tumores es la sustitución de la Valina 600 por un Glutámico (V600E) en la proteína BRAF. Esta mutación causa una hiperactivación de la vía de las ERK-MAPKs, favoreciendo la proliferación e invasividad tumoral e inhibiendo la muerte celular por apoptosis [2,3]. Sin embargo, las terapias con inhibidores de BRAF no dan los resultados esperados en el tratamiento del cáncer de tiroides, ya que, por una parte, estas células crean resistencia a este tratamiento y, por otra, causan importantes efectos adversos en la piel asociados a hiperproliferación llegando, en algunos casos, a producirse carcinomas de células escamosas y queratoacantomas en un 15-30% de los pacientes [4]. Debido a esto, se plantea la necesidad de utilizar terapias combinadas para aumentar la efectividad y especificidad del tratamiento en este tipo de cáncer. Por otra parte, las células tumorales reprograman su metabolismo energético por modificaciones en la expresión y actividad de enzimas metabólicas, para favorecer la proliferación acelerada. Por ello, el metabolismo de las células tumorales es una diana emergente para el tratamiento del cáncer, pudiendo usarse como terapia combinada con otros compuestos para aumentar la eficacia del tratamiento [5-8]. Estudios previos de nuestro laboratorio nos indican que la glucolisis es necesaria para la supervivencia de las células tumorales tiroideas con el oncogén V600EBRAF, por ello estudiamos la posibilidad terapéutica de combinar la inhibición glucolítica con la 2-Desoxyglucosa (2DG) y la inhibición de BRAF con PLX4720. Nosotros demostramos, en primer lugar, que tanto la inhibición del metabolismo de la glucosa, con el compuesto 2-Deoxyglucosa, como la inhibición del oncogén, disminuyen la captura de glucosa y producción de lactato, en la línea celular BHT101, derivada de un tumor anaplásico tiroideo. A continuación, estudiamos como la inhibición conjunta del oncogén V600EBRAF y del metabolismo glucolítico afectan a la viabilidad y supervivencia de las células BHT101 tanto in vitro, mediante distintas técnicas como MTT, capacidad de formación de colonias, TMRM, análisis del ciclo celular y determinación de células no viables positivas en ioduro de propidio por citometría de flujo; como in vivo, tras la generación de tumores xenografos en ratones nude tratados con los tratamientos individuales o en combinación. Los resultados obtenidos permiten concluir que la inhibición conjunta del oncogén V600EBRAF y la glucolisis aumenta la muerte celular in vitro, de forma independiente a apoptosis. Este efecto terapéutico también se observa in vivo en cuanto al tamaño tumoral en células anaplásicas tumorales tiroideas. Además, la modulación que ejercen sobre la glucolisis ambos tratamientos parece estar relacionada con cambios en la actividad de las proteínas implicadas en el metabolismos energético de las vías AMPK/ACC y mTOR/S6K, según muestran sus niveles de fosforilación medidos por WB. Finalmente, concluimos que la inhibición de la glucolisis con 2DG podría ser usado como terapia en los tumores tiroideos con la mutación V600EBRAF que no responden adecuadamente al tratamiento convencional con PLX4720.

Cita: Gallego Tamayo, Beatriz; Gago Díaz, Sergio; Chiloeches Gálvez, Antonio (2019) El bloqueo de la glucolisis colabora con la eficacia terapéutica de la inhibición de V600EBRAF en células tumorales tiroideas. Actas del IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019. 20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión A2, Cáncer. dianas 8 (1): e201903a21. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201903a21 http://www3.uah.es/dianas?e201903a21. URI http://hdl.handle.net/10017/15181. DOI https://doi.org/10.37536/DIANAS.2019.8.1.9

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