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dianas 8 (1) Peña-Asensio y Larrubia 2019 El tratamiento prolongado de la hepatitis B crónica eAg(-) con análogos de nucleós(t)idos junto a un nivel bajo de AgHBs se asocia a una respuesta CD8 VHB específica no agotada.

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dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a34

El tratamiento prolongado de la hepatitis B crónica eAg(-) con análogos de nucleós(t)idos junto a un nivel bajo de AgHBs se asocia a una respuesta CD8 VHB específica no agotada.

Hospital Universitario de Guadalajara.

ahlnd.julia@gmail.com  bjuan.larrubia@uah.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A3, Mixta.

Resumen

Introducción y objetivos: La respuesta CD8 VHB específica está agotada durante la hepatitis crónica B eAg negativo (HCBe(-)). El tratamiento con análogos de nucleós(t)idos (AN) controla la replicación del VHB pero debe administrarse de forma indefinida. Sin embargo, la recuperación de una respuesta celular citotóxica VHB-específica no exhausta podría permitir la cura funcional y la suspensión del tratamiento. En este estudio, se comparó la respuesta CD8 VHB específica en pacientes con HCBe(-) tratados con AN en función de la duración del tratamiento y el nivel de HBsAg. Métodos: Se reclutaron un total de 37 pacientes HLA-A2+ con HCBe(-): 25 casos tratados durante menos de 6.5 años(<6.5a) y 12 pacientes durante más de ese tiempo (>6.5a). Se determinaron los niveles séricos de antígeno HBs (HBsAg). Mediante citometría de flujo, se visualizaron las células CD8 de sangre periférica específicas contra el epítopo HBV-Core18-27, utilizando co-tinción con complejos pentámericos, anti-CD3 y anti-CD8 (CD8+/Pent+). En las células CD8+/Pent+, se analizó: fenotipo PD-1/CD127; producción de interferón-gamma (IFNg); movilización de CD107a; capacidad de proliferación antígeno específica. Resultados: El nivel de HBsAg se correlacionó de forma negativa con la duración del tratamiento (r=-0.333; p=0.044) y fue mayor en el grupo <6.5a (3.36log UI; Rango intercuartil (RIQ) 1.2) que en el >6.5a (2.7log UI; RIQ 2.9), (p=0.023). La frecuencia de células CD8+/Pent+ sobre el total de células CD8 fue mayor en el grupo >6.5a (0.9%; RIQ 0.08) que en el grupo<6.5a (0.006%; RIQ 0.02) (p=0.001). En el grupo >6.5a se detectaron células CD8+/Pent+ en el 100% de los casos mientras que esto solo ocurrió en el 20% del grupo <6.5a (p=0.001). ). Además, en el grupo >6.5a, el nivel de HBsAg se correlacionó de manera negativa con la frecuencia de células CD8+/Pent+ (r=-0.786; p=0.036). La duración del tratamiento >6.5a y el nivel HBsAg<3.2log UI se correlacionó de manera positiva con la capacidad proliferativa de las células CD8+/Pent+ (r=0.668; p<0.001). La capacidad de degranulación de las células CD8+/Pent+ se correlacionó de manera positiva con la duración del tratamiento >6.5a y un nivel HBsAg<3.2log UI (r=0.794; p=0.006). Globalmente, el grupo >6.5a presentó una expresión de CD107a mayor (277 intensidad media de fluorescencia (IMF); RIQ 278) que el grupo <6.5a (IMF 166; RIQ 84), (p<0.05). La secreción de IFNg fue más alta en el grupo >6.5a con HBSAg<3.2log UI (111 IMF; RIQ 174) con respecto al resto de grupos (IMF 48; RIQ 52), (p<0.05). En ambos grupos del estudio las células CD8+/Pent+ expresaban un fenotipo PD-1/CD127 positivo. Conclusión: Un tratamiento con NUC superior a 6.5 años asociado a un nivel inferior a 3.2log UI de HBsAg se asocia a la presencia de una población CD8 VHB específica PD-1+/CD127+ con capacidades efectoras restauradas que podrían impactar en el desarrollo de una cura funcional.

Cita: Peña-Asensio, Julia; Larrubia, Juan Ramón (2019) El tratamiento prolongado de la hepatitis B crónica eAg(-) con análogos de nucleós(t)idos junto a un nivel bajo de AgHBs se asocia a una respuesta CD8 VHB específica no agotada. Actas del IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019. 20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión A3, Mixta. dianas 8 (1): e201903a34. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201903a34 http://www3.uah.es/dianas?e201903a34. URI http://hdl.handle.net/10017/15181. DOI https://doi.org/10.37536/DIANAS.2019.8.1.16

Copyright: © Peña-Asensio J, Larrubia JR. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 8 (1) Errazquin etal 2019 Generación de herramientas de utilidad preclínica para el estudio del cáncer oral en pacientes con anemia de Fanconi.

dianas 8(1) > Errazquin etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a33

Generación de herramientas de utilidad preclínica para el estudio del cáncer oral en pacientes con anemia de Fanconi.

CIEMAT-Instituto de Investigación Hospital 12 de Octubre.

aricardo.errazquinciudad@externos.ciemat.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A3, Mixta.

Resumen

La anemia de Fanconi (AF) es una enfermedad rara, genética recesiva, producida por mutaciones en genes de la ruta de Fanconi, implicada en reparación de ADN. La AF se caracteriza por fallo en médula ósea, malformaciones y alta incidencia de carcinomas escamosos de cabeza y cuello (CECyC). El CECyC en pacientes AF tiene mal pronóstico, y los tratamientos convencionales (quimio/radioterapia) presentan una elevada toxicidad en estos pacientes. El principal objetivo de este trabajo es generar herramientas de utilidad preclínica para obtener tratamientos efectivos y de baja toxicidad. Hemos observado que la línea de CECyC VU1365 derivada de un paciente AF con mutación en FANCA (el gen más frecuentemente alterado en AF), aunque no presenta diferencias en proliferación respecto a una versión corregida (VU1365+FANCA), si tiene una mayor capacidad de migración y una mayor sensibilidad a tratamiento con agentes genotóxicos (mitomicina-C y cisplatino). Estas diferencias pueden estar asociadas a distintos perfiles de expresión génica global, lo que permitiría la predicción de terapias efectivas mediante herramientas in silico. Por otro lado, se ha utilizado la tecnología CRISPR/Cas9 para introducir mutaciones inactivantes en FANCA en la línea celular Cal27, derivada de un CECyC de un paciente sin AF. Hemos obtenido exitosamente clones editados de Cal27 que no expresan proteína FANCA. Este resultado facilita la generación de nuevas líneas celulares de CECyC editadas para el análisis fenotípico y de expresión génica.

Cita: Errazquin, Ricardo; Segrelles, Carmen; García-Escudero, Ramón (2019) Generación de herramientas de utilidad preclínica para el estudio del cáncer oral en pacientes con anemia de Fanconi. Actas del IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019. 20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión A3, Mixta. dianas 8 (1): e201903a33. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201903a33 http://www3.uah.es/dianas?e201903a33. URI http://hdl.handle.net/10017/15181. DOI https://doi.org/10.37536/DIANAS.2019.8.1.15

Copyright: © Errazquin R, Segrelles C, García-Escudero R. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 8 (1) Miguélez 2019 Aproximación al estudio de las alteraciones moleculares responsables del desarrollo del cáncer de próstata resistente a la castración.

dianas 8(1) > Miguélez

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a32

Aproximación al estudio de las alteraciones moleculares responsables del desarrollo del cáncer de próstata resistente a la castración.

lmiguelez.uah@gmail.com

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A3, Mixta.

Resumen

El cáncer de próstata (CP) es el segundo cáncer más frecuente en los hombres a nivel mundial. La mayoría de los tumores de próstata son dependientes de andrógenos, por lo que el principal tratamiento es la deprivación androgénica. El RA es un factor de transcripción que regula la expresión de genes implicados en la diferenciación de la próstata y en la progresión del ciclo celular. La respuesta al bloqueo hormonal es limitada y con el tiempo en un gran número de casos el tumor progresa a un fenotipo mucho más agresivo denominado CP resistente a la castración (CPRC). Entre los mecanismos moleculares implicados en este proceso está la expresión de variantes de splicing del RA (ARV7) que carecen del dominio de unión a ligando y que inducen un perfil de expresión diferente al del RA. Esto puede ser debido a que ambos interaccionan con diferentes proteínas como mecanismo para regular la expresión génica. Otro mecanismo implicado en el CRPC es la fosforilación y activación del RA por vías de transducción de señales alternativas. En este sentido, en CP se produce una disminución de la expresión de la tirosina fosfatasa SHP-1, una de las responsables de la regulación de estas vías de señalización. Por ello, el objetivo de este trabajo fue identificar las proteínas que interaccionan con SHP-1, AR y ARV7 en células de CP sensible y resistente al tratamiento hormonal. La comparación de las proteínas que interaccionan con RA, ARV7 ayudará a identificar las proteínas responsables del diferente perfil de expresión regulado por ambos receptores y las que interaccionan con SHP-1 a entender los mecanismos por lo que se activa el RA en ausencia de ligando. Para ello, hemos puesto a punto un sistema que permite identificar interacciones proteína-proteína in vivo, denominado BioID. Este método consiste en generar una proteína de fusión formada por nuestra proteína de interés y una biotina ligasa promiscua (BirA) que biotinila proteínas por proximidad. Estas construcciones las hemos generado en un vector de expresión y se han transfectado en células de CP sensibles y resistentes a los tratamientos hormonales. En una siguiente fase, se identificarán mediante espectrometría de masas las proteínas biotiniladas que son candidatas a interaccionar con nuestra proteína de interés. Los resultados obtenidos nos permitirán definir los mecanismos moleculares responsables del progreso del CP a la fase resistente al bloqueo hormonal e identificar nuevas dianas terapéuticas para esta fase del CP.

Cita: Miguélez, Laura (2019) Aproximación al estudio de las alteraciones moleculares responsables del desarrollo del cáncer de próstata resistente a la castración. Actas del IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019. 20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión A3, Mixta. dianas 8 (1): e201903a32. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201903a32 http://www3.uah.es/dianas?e201903a32. URI http://hdl.handle.net/10017/15181. DOI https://doi.org/10.37536/DIANAS.2019.8.1.14

Copyright: © Miguélez L. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 8 (1) Tosat-Bitrián etal 2019 Specific biosensors in drug discovery for Amyotrophic Lateral Sclerosis.

dianas 8(1) > Tosat-Bitrián etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a31

Specific biosensors in drug discovery for Amyotrophic Lateral Sclerosis.

Centro de Investigaciones Biológicas, CSIC.

acarlota.tosat@cib.csic.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A3, Mixta..

Resumen

Las enfermedades neurodegenerativas constituyen un problema crítico tanto médico, social como económico en todo el mundo. A pesar de los esfuerzos por comprender mejor las enfermedades neurodegenerativas, hay una falta de conocimiento sobre su patología molecular la cual es crucial para desarrollar nuevos tratamientos efectivos. La esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa caracterizada por la muerte de las motoneuronas (MN) lo cual produce una parálisis progresiva. El mecanismo subyacente a dicha muerte selectiva de las motoneuronas todavía no se ha caracterizado, convirtiéndose en una diana crucial para el desarrollo de fármacos innovadores y efectivos. La técnica de perfil molecular es una tecnología innovadora y potente para estudiar y comprender las rutas y vías de señalización que subyacen los procesos tanto patológicos como fisiológicos. Como herramienta para aplicar esta tecnología, se propone la utilización de los quantum dots (QDs). Los QD son nanopartículas formadas por un núcleo de CdSe y una cubierta de ZnS que ofrecen propiedades fotoluminiscentes únicas. Presentan una alta fotoestabilidad, altos coeficientes de extinción, amplios espectros de absorción pero estrechos de emisión lo cual permite una detección más sensible así como ensayos multiplex. Los QDs han sido conjugados eficientemente con anticuerpos monoclonales (mAB) formando sondas QD-AB que pueden utilizarse en técnicas de inmunofluroescencia implementando un inmunoensayo multiplex basado en QDs. Aplicando esta tecnología, diferentes dianas clave de la ELA como TDP-43, p-TDP-43 y CK1 pueden ser analizadas a nivel de célula única en modelos humanos como linfoblastos y células madre pluripotenciales inducidas de pacientes de ELA El propósito científico de este proyecto es contribuir aún más a comprender la patología molecular de la ELA, encontrando patrones moleculares en los pacientes, detectando así las dianas moleculares de estas enfermedades; y estudiar los cambios moleculares que se producen en las proteínas diana clave tras tratamiento farmacológico ayudando a seleccionar posibles candidatos terapéuticos.

Cita: Tosat-Bitrián, Carlota; Martínez, Ana; Palomo, Valle (2019) Specific biosensors in drug discovery for Amyotrophic Lateral Sclerosis. Actas del IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019. 20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión A3, Mixta.. dianas 8 (1): e201903a31. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201903a31 http://www3.uah.es/dianas?e201903a31. URI http://hdl.handle.net/10017/15181. DOI https://doi.org/10.37536/DIANAS.2019.8.1.13

Copyright: © Tosat-Bitrián C, Martínez A, Palomo V. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 7 (1) Blazquez etal 2018 Cuerpos Apoptóticos: nuevo sistema de comunicación intercelular.

dianas 7(1) > Blazquez etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803a33

Cuerpos Apoptóticos: nuevo sistema de comunicación intercelular.

1. Departamento de Biología, Universidad Autónoma de Madrid, Spain.  2. Departamento de Biología de Sistemas, Universidad de Alcalá, Spain.

arafael.blazquez@estudiante.uam.es

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A3 – Biología y Tecnología Celular

Resumen

Las vesículas extracelulares son vesículas membranosas producidas endógenamente en las células, que transportan complejas cargas en su interior y que se han erigido como un nuevo sistema implicado en la comunicación intercelular a través de la transmisión de señales entre células. Entre esas vesículas extracelulares, que engloba a distintas poblaciones de vesículas, se encuentran los cuerpos apoptóticos. En este trabajo hemos demostrado que los cuerpos apoptóticos procedentes de células renales HK-2 que han sido sometidas a un tratamiento con el fármaco antitumoral, cisplatino, son fagocitados por otras células HK-2 en cultivo e inducen una respuesta en las mismas. Hemos determinado que provocan una disminución de la proliferación celular, de la viabilidad celular y que desencadenan la muerte de esas células receptoras que los fagocitan. Por tanto, suponemos que la nefrotoxicidad mediada por cisplatino en las terapias contra el cáncer, puede estar amplificada por una comunicación intercelular mediada por cuerpos apoptóticos que envían señales de muerte a las células vecinas, y que potencia de este modo la señal iniciada por el cisplatino. En consecuencia, desentrañar el mecanismo de señalización subyacente a esa comunicación, la cual parece estar mediada por la prostaglandina E2 intracelular, nos abriría un mundo de posibilidades para encontrar nuevas dianas terapéuticas con las que combatir la nefrotoxicidad por cisplatino y lograr así tratamientos de quimioterapia más efectivos y con menos efectos nocivos para los pacientes.

Cita: Blazquez, Rafael; García-Pastor, Coral; Lucio-Cazaña, Javier; Fernández-Martínez, Ana-Belén (2018) Cuerpos Apoptóticos: nuevo sistema de comunicación intercelular. Actas del III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018. 20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión A3 – Biología y Tecnología Celular. dianas 7 (1): e201803a33. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201803a33 http://www3.uah.es/dianas?e201803a33. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

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dianas 7 (1) López-Gutiérrez y Jiménez-Ruiz 2018 Introducción del sistema CRISPR/Cas9 en Leishmania infantum.

dianas 7(1) > López-Gutiérrez y Jiménez-Ruiz

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803a32

Introducción del sistema CRISPR/Cas9 en Leishmania infantum

Departamento de Biología de Sistemas, Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

acelialogu@hotmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A3 – Biología y Tecnología Celular

Resumen

El sistema procariota CRISPR/Cas9 (clustered regularly interspaced short palindromic repeats /CRISPR-associated) ha sido adaptado para desarrollar una técnica de edición genómica con gran especifidad. Este sistema consiste en un RNA guía que conduce a la proteína Cas9 a una secuencia diana dentro del genoma para generar un corte de doble cadena, provocando la deleción de genes o la introducción de “tags”. En el género de parásitos Leishmania, la complejidad de su genoma ha dificultado la implantación de otras técnicas de ingeniería génica. Sin embargo, el sistema CRISPR/Cas9 ha demostrado ser eficiente en estos organismos. En 2017, Beneke y colaboradores desarrollaron una herramienta basada en CRISPR-Cas9 que permite el “tageo” y la deleción de genes en diversas especies de tripanosomátidos sin la necesidad de llevar acabo clonaje de DNA, lo cual simplifica y agiliza el desarrollo de la técnica. Esta método consiste en la transfección de un RNA guía y un casete de resistencia a antibiótico, ambos generados por PCR. Para la introducción de esta técnica en Leishmania infantum, se usó como diana una proteína conocida como proteína miristoilada pequeña 4 (SMP-4), la cual se ancla a la membrana celular del parásito por el grupo miristoilo. De esta forma, se produjo la deleción de una de las copias del gene y, por otro lado, se fusionó al gen que codifica para la proteína “NeonGreen”, la cual permite observar la localización de la proteína en el parásito gracias a la emisión de fluorescencia.


  1. Jinek, M., Chylinski, K., Fonfara, I., Hauer, M., Doudna, J.A. and Charpentier, E. 2012. A Programmable Dual-RNA–Guided DNA Endonuclease in Adaptive Bacterial Immunity. 337(6096):816-21.

  2. Lachaud, L., Bourgeois, N., Kuk, N., Morelle, C., Crobu, L., Merlin, G., Bastien, P., Pagès, M. and Sterkers, Y. 2013. Constitutive mosaic aneuploidy is a unique genetic feature widespread in the Leishmania Microbes Infect.16(1):61-6.

  3. Beneke, T., R., Makin, L., Valli, J., Sunter, J. and Gluenz, E. 2017. A CRISPR Cas9 high-throughput genome editing toolkit for kinetoplastids. R Soc Open Sci.4(5):170095.

  4. Tull, D., Naderer, T., Spurck, T., Mertens, H.D., Heng, J., McFadden, G.I., Gooley, P.R., McConville, M.J., 2010. Membrane protein SMP-1 is required for normal flagellum function in Leishmania. J. Cell Sci. 123, 544–554.

Cita: López Gutiérrez, Celia; Jiménez Ruiz, Antonio (2018) Introducción del sistema CRISPR/Cas9 en Leishmania infantum. Actas del III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018. 20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión A3 – Biología y Tecnología Celular. dianas 7 (1): e201803a32. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201803a32 http://www3.uah.es/dianas?e201803a32. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

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dianas 7 (1) López-Llorente y Jorcano-Noval 2018 Detección y caracterización de interacciones físicas y moleculares en cultivos celulares 3D.

dianas 7(1) > López-Llorente y Jorcano-Noval

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803a31

Detección y caracterización de interacciones físicas y moleculares en cultivos celulares 3D.

Centro de Investigaciones Energéticas, Medioambientales y Tecnológicas (CIEMAT). Dirección Completa. Avenida Complutense, 40 (Madrid).España. Email: . Universidad Carlos III de Madrid, Avenida de la Universidad 30, Leganés (Madrid). España. Dpto.Biología de Sistemas, Universidad de Alcalá de Henares (Madrid), España.

averonica.lopez.llorente@gmail.com; veronica.lopez@ciemat.es, veronica.lopez.llorente@gmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A3 – Biología y Tecnología Celular

Resumen

INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS: Además de las señales bioquímicas, factores de crecimiento, hormonas, citoquinas y una compleja red de señalización celular que se encargan de regular procesos de proliferación, diferenciación y migración celular, así como de apoptosis, también se conoce que factores extrínsecos como fuerzas de tracción célula-célula y matriz- célula regulan el comportamiento celular. En tejidos biológicos vivos, estas fuerzas inter e intracelulares son esenciales para mantener la estructura y función del tejido y tienen una gran relevancia en el mantenimiento de la homeostasis (DuFort et al. 2011). La capacidad de las células para integrar esta información mecánica (mecanotransducción) también tiene un papel central en un amplio rango de procesos biológicos y se ha demostrado que tiene implicaciones importantes durante el desarrollo tisular y en el comienzo y progresión de muchas enfermedades (Orr et al. 2006, Ingber 2006). Sin embargo los mecanismos moleculares desencadenados por las respuestas bioquímicas de estas fuerzas mecánicas aún no se conocen bien, debido a la falta de métodos adecuados para medir estas fuerzas intercelulares con una alta resolución espacial y temporal. Por este motivo, el objetivo principal de mi trabajo es desarrollar una nueva metodología experimental para medir la evolución espacio-temporal de las fuerzas intercelulares en tejidos tridimensionales, en concreto durante la morfogénesis epidérmica, mediante experimentos de cell tracking y medición de fuerzas celulares. MÉTODOS: Estos estudios se realizan sobre cultivos organotípicos tridimensionales generados in vitro a partir de queratinocitos y fibroblastos obtenidos de biopsias humanas mediante digestión enzimática y plasma humano procedente de voluntarios sanos. Para los experimentos de cell tracking, dos poblaciones de queratinocitos se transducen para que expresen H2B-GFP y H2B-mCherry respectivamente, de manera que somos capaces de crear una piel in vitro en la que un porcentaje elevado de queratinocitos expresan GFP en su núcleo y alrededor de un 3% de queratinocitos expresan mCherry, lo que facilita la tarea de reconocimiento de los grupos celulares de la membrana basal que van a ser visualizados mediante microscopía confocal a diferentes tiempos durante el proceso formación del epitelio. Para los experimentos de medición de fuerzas, se utiliza un microrod (varilla) de fibra de carbono que es posicionado en la muestra en el momento del inicio de la diferenciación epidérmica. Así, cuando las células comienzan a formar las distintas capas de la epidermis, esta varilla se deforma. Conociendo las propiedades físicas de la fibra de carbono, somos capaces de calcular las fuerzas que están ejerciendo las células a partir de la deformación que han originado las mismas sobre la varilla mediante el análisis de las imágenes obtenidas por microscopía confocal. Además, también se ha incluido en los experimentos, la validación de los resultados obtenidos de la medición de fuerzas a través del método propuesto, mediante la utilización de microscopía de fuerza atómica. El reto que plantean estos estudios es principalmente la inestabilidad de la matriz tridimensional de fibrina que actúa como dermis sustentando el sistema sobre el que se realizan las medidas, ya que se trata de una estructura dinámica que sufre remodelaciones y cambios en su composición a lo largo de los 21 días necesarios para la diferenciación completa de la piel. Por este motivo, como parte de los objetivos del proyecto, se está trabajando en la mejora y optimización de la matriz 3D, mediante la inclusión de nuevos biomateriales naturalmente presentes en la piel.

Cita: López Llorente, Verónica; Jorcano Noval, José Luis (2018) Detección y caracterización de interacciones físicas y moleculares en cultivos celulares 3D. Actas del III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018. 20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión A3 – Biología y Tecnología Celular. dianas 7 (1): e201803a31. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201803a31 http://www3.uah.es/dianas?e201803a31. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

Copyright: © López-Llorente V, Jorcano-Noval JL. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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