Dianas 2(2) > Sobrino etal

Dianas | Vol 2 Num 2 | septiembre 2013 | e20130906

Efecto de la queleritrina y de la ciclosporina sobre la peroxidación lipídica y receptores de somatostatina en hipocampo de rata con encefalomielitis autoinmune experimental.

Carmen Sobrino, Aranzazu Peinares, Lilian Puebla Jiménez, Eduardo Arilla Ferreiro

Departamento de Biología de Sistemas. Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud. Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.

a. csobri@yahoo.es

Palabras clave: esclerosis múltiple; encefalomielitis aguda experimental crónica recidivante; receptor de somatostatina; inhibidores de PKC

Resumen

La esclerosis múltiple (EM) es la causa principal de discapacidad neurológica en adultos jóvenes. La encefalomielitis autoinmune experimental crónica recidivante (EAE-CR) es un modelo animal de la EM. En dichas enfermedades existen infiltrados inflamatorios que contienen linfocitos T, macrófagos y un altogrado de estrés oxidativo en sustancia gris y blanca del sistema nervioso central (SNC).La proteína quinasa θ (PKC θ) se encuentra únicamente en linfocitos T. Se ha descrito que ratones genéticamente deficientes en PKC θ, son resistentes a la inducción de EAE-CR. Por lo tanto la PKC θ es una atractiva diana terapéutica para esta enfermedad. La EAE-CR se indujo en ratas Lewis hembra de 5 semanas de edad mediante inmunización con un homogenado de médula espinal de cobaya. Un grupo de ratas, fue tratado con el inhibidor de PKC α ciclosporina (0,4 mg/Kg), administrado mediante sonda gástrica. Un segundo grupo fue tratado con el inhibidor de PKC θ queleritrina (5 mg/Kg) por vía subcutánea. Ambos tratamientos se iniciaron dos días antes de la inmunización y se continuó mediante administración de dichos inhibidores de PKC, cada dos días hasta el momento del sacrificio. Las ratas se sacrificaron en el primer brote de la enfermedad mediante exanguinación por punción cardíaca y posteriormente se aisló elhipocampo. Las ratas con EAE-CR en grado 3 mostraron un aumento significativo de la peroxidación lipídica en el hipocampo y una disminución significativa de los niveles proteicos del receptor 3 de somatostatina (SSTR3). La administración de queleritrina y ciclosporina revirtieron parcialmente las alteraciones observadas en la EAE-CR. Estos resultados sugieren que la queleritrina puede ser beneficiosa en reducir la peroxidación lipídica y alteraciones secundarias a ella en la EAE-CR.

Dianas 2(2) > Romera etal

Dianas | Vol 2 Num 2 | septiembre 2013 | e20130905

Bases moleculares de la selectividad de ligandos por receptores de melatonina.

Julia A. Romera, Álvaro Cortés-Cabrera, Pedro A. Sánchez-Murcia, Julio Álvarez-Builla, Federico Gago

1. Departamento de Biología de Sistemas, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Área de Farmacología, Departamento de Ciencias Biomédicas, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  3. Departamento de Química Orgánica y Química Inorgánica, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares,Madrid, España.

a. julia.romera@uah.es

Palabras clave: Receptores acoplados a proteínas G (GPCR); Melatonina; Receptores MT1 y MT2; modelado molecular; dinámica molecular; docking; relación estructura-actividad; mutagénesis dirigida

Resumen

La hormona melatonina (MT), o N-acetil-5-metoxitriptamina, secretada por la glándula pineal, es responsable de la regulación del sueño y el ritmo circadiano a través de la modulación del núcleo supraquiasmático, entre otras funciones. MT actúa sobre 2 receptores diferentes, MT1 (o MT1A) y MT2 (o MT1B), que funcionan acoplados a proteínas G (GPCR). La propia melatonina y otros agonistas de los receptores MT pueden ser usadas para marcar los ritmos circadianos, facilitar el sueño o ejercer un efecto en los osciladores periféricos. Por otro lado, los antagonistas de estos receptores se pueden utilizar para mejorar nuestra comprensión del papel de la MT en el organismo. Sin embargo, los trabajos de diseño molecular basados en la estructura se ven obstaculizados por la ausencia de un modelo tridimensional (3D) experimental de los receptores MT1 o MT2. Los modelos construidos por técnicas de homologíaayudan pero tanto el modo real de unión como el mecanismo de activación del receptor siguen estando definidos de forma imprecisa. En este trabajo, hemos utilizado las estructuras 3D recientemente publicadas de los receptores humanos 5-HT1B and 5-HT2B de serotonina (5HT) para construir modelos 3D de los receptores MT1 y MT2 humanos que sirven para explicar una serie de resultados experimentales, incluyendo los provenientes de estudios de mutagénesis dirigida y de selectividad de unión al receptorMT2 de una serie de ligandos sintéticos publicados en la literatura. Nuestros modelos también explican laconservación evolutiva de ciertos aminoácidos clave en toda la familia de receptores MT y destacan lasregiones del bolsillo de unión que pueden ser explotadas para conseguir perfiles distintos de selectividad entre los receptores de MT y 5HT.

Dianas 2(2) > López-García etal

Dianas | Vol 2 Num 2 | septiembre 2013 | e20130904

Evaluación de la seguridad y expediente de información del producto cosmético.

Alicia López García, Tamara María Louzán Pardo, Sonia González Cesisergue

1. Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina,Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Laboratorio Rueda Farma, 28850, Torrejón de Ardoz, Madrid, España.

a. alicia.lopezg89@gmail.com

Palabras clave: Reglamento 1223/2009; Toxicología; Cosmético; Dossier; Seguridad; Test de estabilidad

Resumen

El Reglamento CE 1223/2009 de productos cosméticos se desarrolló para simplificar el marco legal en laUE y facilitar la libre circulación de productos cosméticos. Antes de la aprobación de dicho Reglamento se encontraba vigente la Directiva 76/768/ECC. El Reglamento CE 1223/2009 entró en vigor el 11 de enero de 2010 y su aplicación se hará efectiva el 11 de julio de 2013, por lo que a partir de esta fecha, todos los laboratorios que fabriquen productos cosméticos, deben elaborar un dossier toxicológico para cada unode sus productos cosméticos. El dossier toxicológico es una evaluación de la seguridad del producto cosmético y en él deben incluirse la fórmula cuali-cuantitativa del producto, la existencia de restricciones o reglamentaciones específicas para algún ingrediente, datos toxicológicos de los ingredientes, posiblesinteracciones, capacidad de absorción, margen de seguridad para los ingredientes más críticos.

Dianas 2(2) > García-Centeno y Coello-Molinero

Dianas | Vol 2 Num 2 | septiembre 2013 | e20130903

Aislamiento, purificación y elucidación de productos naturales con actividad antitumoral a partir de organismos marinos. Axinyssmide A y Axinyssmide C.

Antonio García Centeno, Laura Coello Molinero

1. Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina,Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. PharmaMar, Avenida de los Reyes, 1, Polígono Industrial La Mina Norte, 28770, Colmenar Viejo, Madrid, España.

a. antonio.garcen@hotmail.com

Palabras clave: aislamiento; Axinyssmide; cáncer; citotoxicidad; cromatografía; resonancia magnética nuclear; productos naturales

Resumen

PharmaMar es una compañía biofarmacéutica dedicada a la investigación y desarrollo de medicamentos innovadores de origen marino para el área terapéutica de oncología. Concretamente el departamento de Productos Naturales es el encargado del aislamiento y la elucidación de moléculas con actividad citotóxica. En esta memoria se va a exponer todo el proceso de aislamiento de estas moléculas. Partiendo del organismo marino se va a detallar la extracción del mismo, el fraccionamiento y purificación por técnicas cromatográficas, así como la caracterización de dichas moléculas por resonancia magnética nuclear y espectrometría de masas. Concretamente se expondrá todo el proceso basándose en el ejemplo de dos moléculas, la Axinyssmide A y la Axinyssmide C extraídas de la esponja Axinyssa que se recogió en Dili y que poseen una citotoxicidad moderada.

Dianas 2(2) > Del-Monte-Monge etal

Dianas | Vol 2 Num 2 | septiembre 2013 | e20130902

Regulación de la expresión de lamina A/C en la célula T y su papel en la diferenciación de CD4 naïve a célula efectora.

Alberto Del Monte Monge, Marta Blanco Berrocal, José María González Granado, Vicente Andrés

1. Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina,Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Departamento de Epidemiología, Aterotrombosis e Imagen, Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares (CNIC), 28029 Madrid, España.

a. a.delmontemonge@gmail.com

Palabras clave: Lamina A/C; linfocito T; diferenciación; proliferación; activación

Resumen

La lamina A/C es una proteína nuclear con funciones estructurales y de regulación de la señalización celular y la transcripción de genes pero no se ha estudiado en detalle su papel en el sistema inmune. Los linfocitos T CD4+ naïve reconocen un antígeno presentado por una célula presentadora de antígeno (APC), se activan, proliferan y se diferencian a células efectoras para llevar a cabo funciones de respuesta inmune adaptativa. En la activación del linfocito T se producen eventos de señalización celular y transcripción de genes. Estudios previos en el laboratorio han mostrado que la lamina A/C se expresaen el linfocito T tras el reconocimiento de un antígeno para regular el grado de activación posterior del linfocito T. Como continuación, en este estudio se ha pretendido conocer las vías de señalización implicadas en la expresión de lamina A/C en el linfocito T así como establecer un posible papel de la lamina A/C en el proceso de diferenciación del linfocito T naïve a célula T efectora (Th). Para ello, con técnicas de citometría e inmunofluorescencia se ha analizado la expresión de lamina A/C en células T CD4+ de ratón estimulados a diferentes tiempos con y sin inhibidores de diferentes vías de señalización. Estos experimentos han mostrado una expresión transitoria de lamina A/C con un máximo a un día tras laestimulación así como un posible papel las vías de Src quinasas y de MAPK: ERK1/2 y p38 en esta inducción. El análisis por citometría de ensayos de activación, proliferación y diferenciación in vitro de células T CD4+ naïve de ratones WT y deficientes en lamina A/C ha mostrado que la lamina A/C tiene un papel fundamental en el proceso de diferenciación de la célula T CD4+naïve a Th1.

Dianas 2(2) > Bousoño-Rubio

Dianas | Vol 2 Num 2 | septiembre 2013 | e20130901

Obtención de fármacos antitumorales a partir de organismos de origen marino: Jaspamida, un péptido procedente de la esponja Jaspis sp.

Virginia Bousoño Rubio

Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina,Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.; Departamento de Química de Productos Naturales, PharmaMar S.A., 28770 Colmenar Viejo, Madrid, España.

virginia.bousono@gmail.com

Palabras clave: Actividad citotóxica; Jaspis sp.; Jaspamida; HPLC; NMR; Elucidación estructural

Resumen

El cáncer es la segunda causa de mortalidad en Europa y Estados Unidos. Aunque el índice de supervivencia ha mejorado en los últimos años, muchas de las variantes de esta enfermedad aún no tienen cura, por lo que es necesario el descubrimiento y desarrollo de nuevos agentes terapéuticos para combatirla. En la actualidad existe un creciente interés en la búsqueda de moléculas de potencial actividad procedentes del mar, ya que la gran diversidad química y biológica del medio marino es un amplio recurso para la búsqueda de nuevos fármacos antitumorales. El hecho de que el número de fármacos de origen marino descubiertos vaya en aumento se debe a la producción de metabolitos secundarios por parte de los organismos, los cuales han demostrado tener gran valor como agentes citotóxicos. Entre los distintos grupos taxonómicos marinos destaca el de las esponjas (filo Porifera), en el que se han centrado la mayoría de los estudios hasta la actualidad, por su elevada producción de metabolitos secundarios. En el presente estudio se describe el proceso de aislamiento y purificación mediante técnicas cromatográficas, valoración de actividad antitumoral y elucidación estructural mediante resonancia magnética nuclear de la jaspamida a partir de una muestra de Jaspis sp. tomada en Tomori. Son muchos los estudios que avalan el potencial antitumoral de la jaspamida en numerosas líneas celulares de cáncer. El proceso se llevó a cabo en el Departamento de Química de Productos Naturales de PharmaMar, compañía farmacéutica líder en el descubrimiento de tratamientos de origen marino contra el cáncer.

Dianas 2(1) > Velando-Crespo y Sánchez-Morales

Dianas | Vol 2 Num 1 | marzo 2013 | e20130308

Pirfenidona, un nuevo fármaco para el tratamiento de la fibrosis pulmonar idiopática.

Alejandro Velando Crespo, Santiago Sánchez Morales

1. Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Universidad Alcalá, Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Intermune VP Director médico.

a. avelando@intermune.com  b. ssanchez@intermune.com

Resumen

InterMune es una empresa multinacional, farmaceútica, biotecnológica dedicada a la investigación y comercialización de fármacos. En concreto, se trabaja actualmente en la comercialización de un nuevo fármaco, Pirfenidona, autorizado a principios de 2011 por la Agencia Europea del Medicamento (EMA). Pirfenidona es un fármaco antifibrótico, con propiedades antiinflamatorias. Recientemente se ha demostrado que reduce el declive de la función pulmonar en los pacientes con Fibrosis Pulmonar Idiopática (FPI) y retarda la progresión de la enfermedad. Aunque no se conoce bien el mecanismo de acción en humanos, más de 40 publicaciones preclínicas describen el mecanismo de acción antifibrótico y antiinflamatorio de Pirfenidona, y en modelos animales se ha demostrado que reduce la fibrosis enpulmón, hígado, corazón y riñón. Dicha actividad antifibrótica en estos modelos animales proporcionó la base preclínica para investigar su eficacia clínica en la FPI y para realizar estudios adicionales en otras enfermedades con un significativo componente fibrótico. La eficacia clínica de Pirfenidona se comprobó en tres principales estudios de Fase III, multicéntricos, aleatorizados, doble ciego, comparativos conplacebo realizados en pacientes con FPI. Dos de los cuales fueron realizados por InterMune en EE.UU., UE y Australia, llamados 004 (CAPACITY 2) y 006 (CAPACITY 1).

Dianas 2(1) > Madrigal-Martínez etal

Dianas | Vol 2 Num 1 | marzo 2013 | e20130307

Implicación de PGE₂ intracelular en cáncer de próstata.

Antonio Madrigal Martínez, Francisco Javier de Lucio Cazaña, Ana Belén Fernández Martínez

Dpto Fisiología, Facultad de Medicina, Universidad de Alcalá, Ctra. Madrid-Barcelona km 33,6. 28871, Alcalá de Henares, Madrid.

a. antoniomadrigalmartinez@gmail.com  b. javier.lucio@uah.es

Palabras clave: cáncer próstata; PGE2 intracelular HIF-1α; VEGF; proliferación celular; migración

Resumen

El cáncer de próstata es la segunda causa de muerte por cáncer en varones y hasta la fecha, no existe ningún tratamiento eficaz en los estadios más avanzados de la enfermedad, haciendo necesaria la búsqueda de nuevas estrategias de tratamiento. En el presente trabajo se analiza la acción de la PGE2 en el desarrollo del cáncer de próstata. Estudios previos de nuestro grupo de investigación han demostrado que la PGE2 intracelular induce el aumento de la expresión de VEGF a través del factor inducible por hipoxia o HIF-1α en células HK-2, estos dos factores tienen una gran importancia en desarrollo tumoral, por ello nos propusimos analizar las acciones de la PGE2 en cáncer de próstata. Los resultados indican que la PGE2 intracelular induce la proliferación y migración de las células PC3, la expresión del factor inducible por hipoxia o HIF-1α y del principal factor proangiogénico VEGF, promoviendo la superviviencia celular y la angiogénesis, por este motivo proponemos una nueva terapia basada en inhibir el acceso de PGE2 al interior celular, lo que supondría eliminar únicamente la actividad tumorigénica de PGE2, preservando sus efectos fisiológicos.

Dianas 2(1) > Andrés-Soto

Dianas | Vol 2 Num 1 | marzo 2013 | e20130306

Química verde para el tratamiento de la psoriasis: screening de microorganismos hidroxilantes.

Javier Andrés Soto

Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Universidad Alcalá, Alcalá de Henares, Madrid, España.

andres.soto@edu.uah.es

Palabras clave: péptidos antimicrobianos; catelicidina; inflamosoma; psoriasis; queratinocito; biotransformación; screening; hidroxilación; DNA-citosólico

Resumen

La psoriasis es una enfermedad cutánea que aunque en muy pocos casos compromete seriamente la salud de los pacientes, si tiene un fuerte impacto psicológico en una gran mayoría de ellos. GSK comercializa en Estados Unidos un fármaco cuyo principio activo se obtiene a través de procesos químicos muy complejos y costosos. Alternativas que permitan mejorar la producción industrial de esta molécula mejorarían la calidad de vida de un gran número de pacientes. Diferentes autores han descrito microorganismos capaces de realizar la biotransformación de interés, mediante procesos seguros comparados con la síntesis orgánica convencional, y respetuosos con el medio ambiente (baja emisión decontaminantes y poco consumo de energía). El desarrollo de este proyecto consistió en la búsqueda de microorganismos que realicen la hidroxilación en la posición C1 de un sustrato natural; encontrándose en la colección de microorganismos de GSK cepas salvajes capaces de producir la transformación del sustrato siendo en algunos casos el rendimiento mayor que el descrito.