dianas 12(1) > Sánchez-Esteban etal

dianas | Vol 12 Num 1 | marzo 2023 | e202303b09

La delección endotelial de la quinasa ligada a integrinas (ILK) promueve la calcificación valvular en ratones.

Sandra Sánchez-Esteban, Alberto Cook-Calvete, María Delgado-Marín, Rafael Moreno-Gómez-Toledano, Carlos Zaragoza, Marta Saura

Universidad de Alcalá. Departamento de Biología de Sistemas.

a. sandra.sancheze@edu.uah.es

VIII Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2022.
21 a 24 de marzo, 2023. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: Calcificación valvular; ILK; disfunción endotelial

Resumen

La quinasa ligada a integrinas (ILK) es una proteína mecanosensitiva clave para la correcta síntesis de Óxido Nítrico y, por tanto, para el funcionamiento del endotelio. Recientemente hemos demostrado una correlación negativa entre la expresión de ILK y la enfermedad de la válvula aórtica calcificada (CAVD). La disminución de ILK en células endoteliales valvulares humanas promueve tanto la transición endotelio-mesénquima como el aumento de expresión de marcadores de calcificación de forma dependiente de Óxido Nítrico. Para poder estudiar en profundidad el papel de ILK en el desarrollo de la CAVD, hemos generado un modelo murino de deleción condicional de ILK específica de endotelio. Estos animales presentan cambios ecocardiográficos característicos de la estenosis aórtica: disminución de la Fracción de Eyección e incremente del gradiente pico aórtico. Histológicamente observamos un incremento en el grosor de la válvula aórtica acompañado de calcificación. Diversos estudios han demostrado que la Dipeptidilpeptidasa-4 (DPP-4) es una proteína clave implicada en la calcificación valvular que se encuentra sobre expresada en el endotelio disfuncional. El tratamiento del modelo murino de deleción de ILK con Sitagliptina, un inhibidor de la DPP-4, es capaz de prevenir la calcificación.

dianas 12(1) > Mora-Rodríguez etal

dianas | Vol 12 Num 1 | marzo 2023 | e202303b07

Relevancia de la dipeptidil peptidasa 4 (DPP4) en la infección por SARS-CoV-2 en pacientes con Diabetes Mellitus tipo 2.

José M. Mora-Rodríguez, Belén G. Sánchez, Alba Sebastián-Martín, Alba Díaz-Yuste, Alicia Bort, Inés Díaz-Laviada

Facultad de Medicina - Departamento de Biología de Sistemas. Universidad de Alcalá.

a. josem.mora@uah.es; josemmoraro@gmail.com

VIII Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2022.
21 a 24 de marzo, 2023. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: Dipeptidil peptidasa 4; COVID-19; Diabetes mellitus tipo 2; inhibidores

Resumen

La diabetes mellitus tipo 2 (T2DM) es un factor de riesgo de gravedad y mortalidad en pacientes con COVID-19. Además, se ha observado una alta prevalencia de obesidad entre los pacientes ingresados en cuidados intensivos por SARS-CoV-2. Entre los nuevos tratamientos para la T2DM, destacan por su posible implicación en la infección por SARS-CoV-2, los inhibidores de la enzima dipeptidil peptidasa-4 (DPP4). Esta enzima podría ser un receptor de SARS-CoV-2 debido a su capacidad para interaccionar con otros coronavirus como MERS-CoV. De hecho, se acaba de describir que una variante neandertal del promotor de DPP4 duplica el riesgo en los pacientes de ser hospitalizados por COVID-19, correlacionándose los niveles de DPP4 con la severidad de COVID-19. Este estudio se centra en explorar si DPP4 tiene algún papel relevante en los enfermos de T2DM y COVID-19. Para ello, se recolectaron sueros de 190 pacientes del Hospital Ramón y Cajal y se distribuyeron en 6 grupos: sanos, diabéticos, diabéticos tratados con inhibidores de DPP4, COVID-19 positivos, COVID-19 positivos diabéticos y COVID-19 positivos diabéticos tratados con inhibidores de DPP4. A continuación, se determinaron los niveles séricos de DPP4, adiponectina, IgG frente a la proteína S1 de SARS-CoV-2 e IL-6. También se determinó la actividad de DPP4 en el suero de los pacientes. Con estos resultados se pretende ofrecer una nueva visión de la patogénesis viral y potenciar la vigilancia terapéutica en pacientes diabéticos tipo 2 con COVID-19.

Agradecimientos: Esta investigación se enmarca en el proyecto sobre COVID-19 y diabetes (REACT UE-CM2021-02) financiado por la Comunidad de Madrid en convenio con la Universidad de Alcalá, y cofinanciado con recursos REACT-EU del Fondo Europeo de Desarrollo Regional «Una manera de hacer Europa».

dianas 12(1) > Figuer etal

dianas | Vol 12 Num 1 | marzo 2023 | e202303b05

Decorina en plasma de pacientes con enfermedad renal crónica como potencial biomarcador de daño endotelial.

Andrea Figuer, Gemma Valera, Noemí Ceprián, Ignacio González de Pablos, Paula Jara Caro, Pilar Vellisca, Rafael Ramírez, Enrique Morales, Matilde Alique, Julia Carracedo

1. Departamento de Biología de Sistemas, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, Spain.  2. Instituto Ramón y Cajal de Investigación Sanitaria (IRYCIS), 28034 Madrid, Spain.  3. Departamento de Genética, Fisiología y Microbiología, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Complutense de Madrid.  4. Instituto de Investigación Sanitaria Hospital 12 de Octubre (imas12), 28040 Madrid, Spain.  5. Departamento de Nefrología del Hospital Universitario 12 de Octubre, Instituto de investigación i+12, 28041 Madrid, Spain.  6. Departamento de Medicina, Universidad Complutense de Madrid, 28040 Madrid, Spain.

a. andrea.figuer@salud.madrid.org; andrea.figuer25@gmail.com  b. gvalera@ucm.es  c. nceprian@ucm.es  d. ignacioangel.gonzalez@salud.madrid.org  e. jcaroespada@gmail.com  f. mvellisc@ucm.es  g. manuel.ramirez@uah.es  h. emoralesr@senefro.org  i. matilde.alique@uah.es  j. julcar01@ucm.es

VIII Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2022.
21 a 24 de marzo, 2023. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: Biomarcador; Decorina; Disfunción endotelial; Enfermedad Cardiovascular; Enfermedad Renal Crónica; Glicocálix

Resumen

La degradación del glicocálix endotelial se ha relacionado con la disfunción endotelial y alteraciones de la permeabilidad vascular. La escisión del glicocálix supone la liberación de sus componentes al plasma. Entre los componentes del glicocálix destacamos la decorina por su capacidad de unirse al LDL y al colágeno, favoreciendo la formación de placas de ateroma. Los pacientes con enfermedad renal crónica (ERC) tienen un mayor riesgo de sufrir eventos cardiovasculares, cuyo antecedente principal es la disfunción endotelial. Es por ello que nos propusimos valorar la presencia de decorina en plasma de enfermos renales crónicos como posible biomarcador de disfunción endotelial y riesgo cardiovascular. En este estudio se incluyeron 15 controles, 22 pacientes con enfermedad renal crónica avanzada (ERCA), 22 en hemodiálisis (HD), 16 en diálisis peritoneal (DP) y 16 con trasplante renal (TX) de características homogéneas. Se cuantificaron los niveles de decorina en el plasma de enfermos renales crónicos mediante ELISA. Además, se relacionaron estos resultados con el número y fenotipo de monocitos caracterizados mediante citometría de flujo, para relacionarlo con alteraciones inmunitarias observadas en estos pacientes. Los niveles de decorina aumentaron en ERCA comparados con los controles (7,96 ± 4,34 vs 4,82 ± 2,13 ng/mL, p = 0,029), y no fueron modificados en el resto (HD = 7,03 ± 2,91; DP = 5,98 ± 2,71; TX = 4,43 ± 2,94 ng/mL). Los niveles de decorina se relacionan negativamente con los niveles de expresión de la molécula de adhesión ICAM-1/CD54 en los monocitos clásicos, intermedios y no clásicos (respectivamente: r = -0,442, p = 0,001; r = -0,371, p = 0,006; r = -0,328, p = 0,018). En conclusión, la uremia presente en los pacientes con enfermedad renal crónica (principalmente ERCA) genera un deterioro del glicocálix endotelial, que afecta a la capacidad de adhesión de los monocitos. Estas alteraciones podrían propiciar el desarrollo de patologías cardiovasculares. Por ello, la decorina podría considerarse un potencial marcador de daño endotelial en enfermedad renal crónica, y el glicocálix una potencial diana terapéutica.

Financiación: Estudio financiado por el Instituto de Salud Carlos III (ISCIII) en los proyectos “PI17/01029”, “PI19/00240” y “PI20/01321”. A.F. recibió un Contrato Predoctoral en Investigación en Salud del ISCIII (FI20/00018) y G.V. una beca con número PI20/0132.

dianas 12(1) > Valera etal

dianas | Vol 12 Num 1 | marzo 2023 | e202303b02

Perlecan como marcador de daño cardiovascular en enfermedad renal crónica.

Gemma Valera, Matilde Alique, Andrea Figuer, Jara Caro, Noemi Ceprian, Maria del Mar Rodriguez, David Serrano, Enrique Morales, Rafael Ramirez, Julia Carracedo

Departamento de Genética, Fisiología y Microbiología de la UCM/ Instituto de investigación sanitaria del Hospital Universitario 12 de Octubre.

a. gemmavaar@hotmail.com

VIII Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2022.
21 a 24 de marzo, 2023. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: Perlecan; Enfermedad renal crónica; Glicocalix; Disfunción endotelial

Resumen

La enfermedad renal crónica (ERC) se asocia a un daño endotelial asi como con un estado sistémico de inflamación crónica. El daño endotelial se considera uno de los desencadenantes de las enfermedades cardiovasculares (ECV) en estos pacientes, asociadas a su vez a la degradación del glicocálix endotelial. El glicocálix endotelial está formado por glicosaminoglicanos y proteoglicanos, como el Perlecan, y la degradación del glicocálix conduce a la liberación de estas moléculas al torrente sanguíneo. El objetivo del estudio es analizar los niveles de perlecan en plasma en diferentes estadios de la ERC, y relacionarlos con los niveles la expresión de la molécula de adhesión endotelial ICAM-1 (CD54) en monocitos. Se incluyeron 56 pacientes: enfermedad renal crónica avanzada (ERCA) (n=13), hemodiálisis (HD) (n=13), diálisis peritoneal (DP) (n=15) y trasplantados (TX) (n=15). Se incluyeron 13 controles (CT). Se cuantificaron los niveles de perlecan en plasma por la técnica de ELISA y se analizó la expresión de ICAM-1 (CD54) en las distintas subpoblaciones de monocitos por citometría de flujo. Los análisis estadísticos utilizados fueron ANOVA y la correlación de Spearman. Los pacientes con ERCA, HD y DP presentaron niveles elevados de perlecan en plasma en comparación con los CT, siendo los niveles en TX similares a los CT. Los niveles de perlecan se correlacionaron positivamente con la expresión de ICAM-1 en las distintas subpoblaciones de monocitos en pacientes con ERC, especialmente en diálisis (HD y DP). Podemos concluir que los pacientes con ERCA, HD y DP presentan niveles elevados de perlecan en plasma comparados con CT y TX, y que estas concentraciones se asocian a una mayor expresión de ICAM-1. El perlecan se puede postular como un posible marcador de daño cardiovascular en pacientes con ERC.

dianas 12(1) > Asenjo-Bueno etal

dianas | Vol 12 Num 1 | marzo 2023 | e202303b03

Importancia de la fibrosis y la hiperfosfatemia en el deterioro de la función respiratoria en ratones viejos.

Ana Asenjo-Bueno, Ariadna Moreno-Piedra, María Martos-Elvira, Mariano de la Serna-Soto, Lucía de la Mata-María, Gemma Olmos-Centenera, María Piedad Ruiz-Torres, Susana López-Ongil

Biología de Sistemas de la Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud de la UAH.

a. ana.asenjo@edu.uah.es

VIII Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2022.
21 a 24 de marzo, 2023. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: envejecimiento; hiperfosfatemia; fibrosis pulmonar; función respiratoria.

Resumen

El envejecimiento se caracteriza por una pérdida de reserva funcional, asociada a un declive de los distintos sistemas, entre ellos el sistema respiratorio. Asimismo, con la edad, se ha descrito un aumento de los niveles de fósforo en sangre, sin embargo, no se conoce la relación exacta entre el fósforo y la función pulmonar. Por ello, el objetivo del presente estudio fue analizar si la hiperfosfatemia asociada al envejecimiento inducía cambios en la función respiratoria, estudiando tanto la estructura del pulmón como el desarrollo de fibrosis. Para ello, se utilizaron ratones machos de la cepa C57BL6 obtenidos de Janvier Laboratories. Se compararon animales jóvenes de 5 meses de edad frente a animales viejos de 24 meses de edad, todos ellos alimentados con una dieta estándar que contenía un 0.6% de fósforo. Adicionalmente un tercer grupo de animales viejos fue alimentado durante los tres meses previos al sacrificio con una dieta baja en fósforo (0.2%). En primer lugar, se analizaron los niveles de fósforo en sangre, evidenciando un aumento asociado a la edad que la dieta hipofosfatémica fue capaz de revertir. El desarrollo de fibrosis fue evaluado en los pulmones de los ratones mediante la expresión de fibronectina por Western Blot y mediante la tinción con Rojo Sirio, que marca en rojo las fibras de colágeno; en ambos casos los animales viejos presentaban mayor expresión de proteínas de matriz extracelular respecto a los animales jóvenes. Además, los animales viejos que tomaron la dieta baja en fósforo presentaron niveles significativamente más bajos en comparación con los viejos sin dieta. Por otra parte, se analizó la expresión de Elastina en pulmón mediante una tinción específica que marca las fibras de Elastina en negro. Tal y como está descrito en el envejecimiento hay un descenso que, sin embargo, la dieta baja en fósforo no revertía. Por último, se estudió la función respiratoria de los animales utilizando un pletismógrafo de doble cámara. Con la edad, la función respiratoria de los animales empeoraba, sin embargo, la dieta baja en fósforo consiguió mejorar ciertos parámetros, evidenciando la importancia del fósforo en este proceso. En conclusión, la hiperfosfatemia asociada al envejecimiento parece desempeñar un papel importante en el deterioro de la función respiratoria, probablemente debido al aumento de fibrosis observado en el pulmón de ratones viejos.

dianas 12(1) > Jiménez etal

dianas | Vol 12 Num 1 | marzo 2023 | e202303b10

Nanotecnología aplicada a la resolución de la respuesta inflamatoria en un modelo porcino de infarto agudo de miocardio.

Beatriz Jiménez, Laura Tesoro, Rafael Ramírez, Ignacio Hernández, Javier Díez, Nunzio Alcharani, Claudia González, Marta Saura, Laura Botana, Jose Luis Zamorano, Carlos Zaragoza

Unidad Mixta de Investigación Cardiovascular Translacional Hospital Universitario Ramón y Cajal - Universidad Francisco de Vitoria. Carretera M-607, 9, 100, 28034 Madrid.

a. b.jimenezguirado@gmail.com

VIII Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2022.
21 a 24 de marzo, 2023. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: Infarto Agudo de Miocardio (IAM); Insuficiencia cardiaca (IC); receptor de quimiocina tipo 2 (CCR2); monocitos; macrófagos residentes de tejido (TRM); interleucina 10 (IL-10); receptor IL-10 (IL10-R); STAT3; NIL10; Isquemia/Reperfusión (I/R)

Resumen

Las enfermedades cardiovasculares (ECV) son la principal causa de defunción mundial, siendo la más común el infarto agudo de miocardio (IAM). Esta patología se caracteriza por la oclusión de una o varias arterias coronarias por un trombo o una placa de ateroma, dando lugar a un proceso de necrosis debido a la hipoxia del tejido cardiaco. La necrosis miocárdica tiene como consecuencia la activación de una respuesta inflamatoria, que da lugar al remodelado del corazón, bombeando sangre a mayor frecuencia y/o incrementando el volumen de sangre en cada latido en el ventrículo izquierdo. La desoclusión del trombo o placa de ateroma mediante angioplastia coronaria será la forma de supervivencia del paciente, aunque en función del tiempo de reacción, el grado de insuficiencia cardiaca (IC) posterior, derivada del remodelado adverso que surge en función del mayor tiempo de hipoxia, constituye el principal impedimento para la vida del paciente post-infarto, fenómeno asociado a una gran mortalidad y morbilidad. En la respuesta inflamatoria que surge tras la hipoxia miocárdica, los macrófagos ejercen un papel esencial y provienen tanto de monocitos circulantes (expresan el receptor de quimiocina 2 (CCR2+), como residentes de tejido (CCR2-). Estos macrófagos presentes en el miocardio necrótico poseen la capacidad de polarizar, cambiar su fenotipo y por tanto sus funciones, dependiendo de las señales externas que reciban, diferenciándose en macrófagos pro-inflamatorios (clásicamente denominados M1), o resolutivos (también denominados anti-inflamatorios o M2) encargados de la eliminación de restos tisulares y síntesis de matriz extracelular (MEC). La correcta polarización de macrófagos M1 hacia el estado M2 está asociada con la actividad anti-inflamatoria de una batería de moléculas denominadas interleucinas (IL), de entre la que cabe destacar el papel de la interleucina 10 (IL-10), como principal valedora del proceso, impidiendo la extensión de la inflamación aguda descontrolada, la consecuente fibrosis tisular, y, en definitiva, reducir el grado de IC. IL-10, a través de la unión ligando-receptor (IL10-R) induce una cascada de señalización intracelular, a través de la ruta JAK/STAT3, cuya consecuencia final supone la inhibición de factores pro-inflamatorios, destacando la del factor por excelencia NF-ҡB, generando de esta forma el cese de la respuesta inflamatoria tisular. Nuestro equipo de investigación , en base a su experiencia en el campo de la nanotecnología aplicada a la mejora de la fusión cardiaca en infarto de miocardio, propone su utilización para analizar el efecto de IL-10 en la polarización macrofágica y en la aceleración de la fase resolutiva en un modelo porcino de isquemia y reperfusión (I/R) coronaria mediante el uso de nanopartículas micelares conjugadas con péptidos análogos a IL-10, a las que denominamos NIL10. En primer lugar, comprobamos la especificidad de NIL10 en su diana, el receptor de IL-10, IL10-R, observando que la mejora en la funcionalidad cardiaca tras el tratamiento con NIL10 está asociada con la activación de la ruta IL10-R/STAT3, y con una disminución significativa tanto de monocitos como macrófagos circulantes CCR2+ tras el periodo de isquemia y posterior reperfusión, lo que sugiere que NIL10 podría constituir una buena herramienta terapéutica para reducir el remodelado cardiaco adverso que sucede tras el infarto, a través de la aceleración de la resolución del proceso inflamatorio que surge en el miocardio del paciente infartado.

dianas 12(1) > Delgado-Marín etal

dianas | Vol 12 Num 1 | marzo 2023 | e202303b08

Perfil de microRNAs en el contexto de la CAVD.

María Delgado-Marín, Rafael Moreno Gómez-Toledano, Sandra Sánchez-Esteban, Alberto Cook, Sara Jorquera, Marta Saura

Universidad de Alcalá. Departamento de Biología de Sistemas (Unidad de Fisiología).

a. maria.delgadom@uah.es; mariadm.2898@gmail.com

VIII Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2022.
21 a 24 de marzo, 2023. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: microRNAs; CAVD; enfermedad cardiovascular; biomarcador

dianas 12(1) > Cook-Calvete etal

dianas | Vol 12 Num 1 | marzo 2023 | e202303b06

Papel de la ILK y en la remodelación cardiovascular.

Alberto Cook-Calvete, María Delgado-Marín, Sandra Sanchez-Esteban, Rafael Moreno-Gómez-Toledano, Sara Jorquera, Marta Saura

Universidad de Alcalá.

a. mcooky_8@hotmail.com

VIII Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2022.
21 a 24 de marzo, 2023. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: Kinasa ligada a integrinas; vesículas extracelulares; transición endotelio-mesénquima

Resumen

El fenómeno de transición endotelio-mesénquima (EndMT) es un proceso fisiopatológico en el cual las células endoteliales cambian su fenotipo hacia uno de carácter mesenquimal. El inicio de esta transformación se caracteriza por la pérdida de las uniones celulares a la matriz extracelular, permitiendo su posterior migración exógena. La quinasa ligada a integrinas (ILK) es una serin-treonin quinasa que se encuentra unida a las integrinas sirviendo de proteína de anclaje a numerosas moléculas, entre ellas la óxido nítrico sintasa. Por ello, nuestro laboratorio ha decidió explorar el papel que puede tener la ILK en el inicio y desarrollo de la transición endotelio-mesénquima. A la vista de los resultados obtenidos, se han planteado futuros experimentos para tratar de esclarecer los mecanismos celulares implicados en la transmisión de señales que pueda ocasionar el inicio de la EndMT.

dianas 12(1) > González-Cucharero etal

dianas | Vol 12 Num 1 | marzo 2023 | e202303b04

Diseño de un modelo preclínico porcino de disfunción valvular.

Claudia González-Cucharero, Javier Díez, Ignacio Hernández, Laura Tesoro, Laura Botana, Nunzio Alcharani, Beatriz Jiménez, Carlos Zaragoza, Rafael. Ramírez-Carracedo

Hospital Universitario Ramón y Cajal.

a. claudia311099@gmail.com

VIII Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2022.
21 a 24 de marzo, 2023. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: insuficiencia valvular; válvula tricúspide; filtro IVC; HCN4

Resumen

Las enfermedades cardiovasculares (ECVs) son la primera causa de muerte en el mundo, y de ellas, las valvulopatías destacan por su alta frecuencia y por las consecuencias sobre la salud del paciente. La insuficiencia valvular conlleva el cierre incompleto de una o varias válvulas cardiacas, y entre sus consecuencias más frecuentes se encuentra la dilatación de las aurículas y los ventrículos y la regurgitación de la sangre a las aurículas. Esta alteración, cuando afecta a la válvula tricúspide, supone un daño mecánico en el tejido que, a largo plazo puede suponer un remodelado adverso de la matriz extracelular y la aparición de focos ectópicos de corriente, causando la aparición de arritmias. Es por tanto de suma importancia encontrar nuevos marcadores y dianas terapéuticas asociadas a la insuficiencia valvular, y para ello es imprescindible el uso de modelos animales de experimentación de esta patología. Sin embargo, a día de hoy no existen modelos fiables de IT en animales cuya anatomía cardiaca sea similar a la del ser humano. En este trabajo proponemos la introducción de un filtro IVC (vena cava inferior) para fijar los velos de la válvula tricúspide y mantenerla abierta permanente, consiguiendo así un modelo poco lesivo, económico y fácilmente replicable de insuficiencia tricúspide en cerdo. Asimismo, hemos llevado a cabo análisis del sistema de conducción donde hemos visto una expresión anormal de los canales de HCN4, los cuáles conducen la corriente «funny» (If), que desempeña un papel fundamental en la actividad de marcapasos del nódulo sinoauricular. Este modelo porcino de disfunción valvular nos permitirá llevar a cabo estudios preclínicos a nivel experimental en patología valvular.