dianas 9(1) > Gutiérrez-Calabrés etal

dianas | Vol 9 Num 1 | marzo 2020 | e202003b07

Incremento de calpaínas 1 y 2 durante el desarrollo de enfermedad renal crónica en ratones alimentados con una dieta rica en adenina.

Elena Gutiérrez-Calabrés, Sofía Campillo, Lourdes Bohórquez, Mercedes Griera, Diego García-Ayuso, David Vaillo, Sergio de Frutos, Manuel Rodríguez-Puyol, Laura Calleros, Diego Rodríguez-Puyol

Dpto. Biología de Sistemas. Facultad de Medicina, Universidad de Alcalá. Crta. Madrid - Barcelona Km 33,600 28871 - Alcalá de Henares (Madrid).

a. elena.gutierrez@edu.uah.es

V Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2020.
16-18 de marzo, 2020. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: Enfermedad renal crónica; calpaína; adenina; fibrosis

Resumen

Las calpaínas son cisteín-proteasas intracelulares que juegan un papel crítico en el remodelado celular, estando implicadas en múltiples procesos biológicos ligados a los mecanismos de daño y reparación tisular. Además, son liberadas a la circulación, pudiendo ejercer acciones sistémicas de consecuencias patológicas. El objetivo de este estudio fue investigar el papel de las calpaínas en la progresión de la enfermedad renal crónica (ERC) en un modelo experimental de daño renal crónico inducido por adenina. Para ello alimentamos durante 2 semanas a ratones C57BL/6 con una dieta con un 0,2% de adenina (A). Los animales que reciben esta dieta desarrollan un daño tubulointersticial similar al observado en pacientes con ERC. Como controles se utilizaron ratones con una dieta estándar (C). La función renal se evaluó midiendo el BUN y la creatinina (mg/dl) en plasma. Los marcadores de fibrosis (colágeno tipo I y fibronectina) se determinaron mediante RT-qPCR. Los cambios en el contenido renal de calpaínas 1 y 2 se analizaron mediante western blot (contenido proteico), y RT-qPCR (expresión génica). Nuestros resultados mostraron cambios funcionales y estructurales a nivel renal en los ratones alimentados con adenina, con un aumento de BUN (A: 72 mg/dl, C: 28 mg/dl, p < 0.05), creatinina (A: 0.58 mg/dl, C: 0.25 mg/dl, p < 0.05), expresión génica de colágeno tipo I (A: 12.9 unidades, C: 1.2 unidades, p < 0.05) y expresión génica de fibronectina (A: 3.46 unidades, C: 1.3 unidades, p < 0.05). Además, el contenido proteico de calpaínas 1 (A: 1.27 unidades, C: 0.78 unidades, p < 0.05) y 2 (A: 1.30 unidades, C: 0.66 unidades, p < 0.05) fue significativamente mayor en los ratones con dieta rica en adenina respecto a los controles. Al mismo tiempo, observamos un aumento significativo en la expresión génica de calpaína 1 (A: 4.21 unidades, C: 0.51 unidades, p < 0.05) y 2 (A: 4.93 unidades, C: 0.56 unidades, p < 0.05) en el modelo de adenina en comparación con los ratones con dieta estándar. Nuestros resultados demuestran que la expresión de calpaína 1 y 2 en el tejido renal aumenta al progresar la ERC. Además, encontramos correlaciones estadísticamente significativas entre el contenido renal de proteínas y ARNm de calpaínas 1 y 2 y el BUN y creatinina plasmáticos (p < 0.05, r entre 0.79 y 0.92), así como entre el contenido proteico de calpaína 2 y la expresión de ARNm de colágeno tipo I (p < 0.05, r = 0.76). Estos datos sugieren una posible relación directa entre el contenido renal de calpaínas 1 y 2 y la pérdida de función renal, en parte debido probablemente a la modulación de los cambios fibróticos en los ratones alimentados con adenina. Sugerimos una implicación de las calpaínas 1 y 2 en el desarrollo de ERC. Por lo tanto, el bloqueo efectivo de calpaína o su regulación negativa podría ser útil como estrategia terapéutica para prevenir la ERC. Son necesarios más experimentos para establecer la relación entre estos factores.

dianas 9(1) > Reventun etal

dianas | Vol 9 Num 1 | marzo 2020 | e202003b06

Bisphenol A induces coronary endothelial cell necroptosis by activating RIP3 /CamKII dependent pathway.

Paula Reventun, Sandra Sanchez-Esteban, Alberto Cook, Irene Cuadrado, Carolina Roza, Rafael Moreno-Gomez-Toledano, Carmen Muñoz, Carlos Zaragoza, Ricardo J Bosch, Marta Saura

Universidad de Alcalá.

a. sandrasanchez07@hotmail.com

V Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2020.
16-18 de marzo, 2020. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

dianas 9(1) > Reventun etal

dianas | Vol 9 Num 1 | marzo 2020 | e202003b05

Deletion of endothelial ILK ​accelerates the development of calcific aortic valve disease​.

Paula Reventun, Sandra Sanchez-Esteban, Mercedes Castro, Cristina Trilla, Ignacio Hernández, Jose López-Menéndez, Carlos Zaragoza, Marta Saura

Universidad de Alcalá.

a. sandrasanchez07@hotmail.com

V Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2020.
16-18 de marzo, 2020. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

dianas 9(1) > Valera

dianas | Vol 9 Num 1 | marzo 2020 | e202003b04

Subpoblaciones de monocitos en pacientes con enfermedad renal crónica. Análisis prospectivo en hemodiálisis.

Gemma Valera

Facultad de Biología de la Universidad Complutense de Madrid. Calle José Antonio Novais, 12, 28040 Madrid.

gemmavaar@hotmail.com

V Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2020.
16-18 de marzo, 2020. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: Enfermedad renal crónica; subpoblaciones de monocitos; citometría de flujo; senescencia celular; disfunción endotelial

Resumen

La enfermedad renal crónica (ERC) se asocia a una senescencia celular y un daño endotelial que se relaciona con enfermedades inflamatorias, como la aterosclerosis y la enfermedad cardiovascular. La modulación de los monocitos de sangre periférica se ha relacionado con la activación y apoptosis de células endoteliales, y, por consiguiente, la aparición de enfermedades inflamatorias y cardiovasculares. El objetivo del proyecto fue cuantificar subpoblaciones de monocitos en enfermos de ERC en distintos estadios de la enfermedad, así como entre diferentes tratamientos de la misma, e identificar características senescentes y diferenciales en estas células (expresión de CD14, CD16, CD86, CD54), utilizando la técnica de citometría de flujo. De igual manera, se realizó un estudio prospectivo de 6 meses en pacientes sometidos a hemodiálisis, con el objetivo de evaluar el efecto del tratamiento sobre las subpoblaciones de monocitos. Nuestros resultados demuestran que en la ERC hay cambios en relación a la proporción de las diferentes subpoblaciones monocíticas en los diferentes grupos de estudio, así como en a expresión de las moléculas CD54 y CD86.

dianas 9(1) > Peña-Asensio etal

dianas | Vol 9 Num 1 | marzo 2020 | e202003b03

Interleucina-15 restaura la reactividad de la población T CD8 periférica memory-like exhausta HBV-específica en pacientes con Hepatitis crónica B.

Julia Peña Asensio, Eduardo Sanz de Villalobos, Joaquín Míquel, Alejandro González-Praetorius, Juan Ramón Larrubia

Hospital Universitario de Guadalajara. Universidad de Alcalá.

a. julia.pena@uah.es

V Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2020.
16-18 de marzo, 2020. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: Inmunología; Hepatitis virales; VHB; memoria inmunológica; IL-15;

Resumen

Introducción y objetivos: Las células memory-like periféricas (MLP) antígeno (Ag)-específicas se definen por la expresión del factor de transcripción TCF1 y son las encargadas de generar la progenie (P) efectora. Esta población podría estar agotada durante la infección por el virus de la hepatitis B (VHB). La interleucina (IL)-15 podría inducir la proliferación homeostática de esta población y generar una P con mejor capacidad efectora. Métodos: Se seleccionaron 6 pacientes HLA-A2+ con infección crónica B eAg(-) coinfectados con citomegalovirus (CMV). Se separaron los linfocitos y se cultivaron con los péptidos VHB-core18-27 y CMVpp65495-504 durante 20 días con IL-2 o IL-15. Las células Ag-específicas se visualizaron mediante tinción con complejos pentaméricos HLA-A2/péptido (pentámeros) por citometría de flujo. Las células MLP se definieron como Pentamero+TCF1+FSCalto y la P como Pentamero+TCF1-. En el día 7, se comprobó el fenotipo (PD-1, CD127, Glut1, CPT1a, PGC1α) en la población MLP y en el día 10 la función efectora (IFNγ, TNFα, CD107a) de la población P. Resultados: Las dinámicas observadas en la población MLP fueron diferentes entre CMV y VHB. El pico de proliferación de las células MLP observado el día 7 era 10 veces más bajo en HBV. Como consecuencia de la proliferación de las MLP, se observó el pico de proliferación de las P el día 9 en ambos grupos, pero en VHB el número de células era 12 veces menor. Las células MLP VHB-específicas presentaban un fenotipo agotado, con mayor expresión de PD-1 y CD127. Además, su biogénesis mitocondrial se encuentra comprometida, lo que se observa mediante la disminución del cofactor PGC1a. Los niveles de Glut1 y CPT1a fueron similares entre las MLP, sin embargo las progenies que produjeron fueron distintas, mostrando un perfil más glicolítico de las células VHB-específicas. Esto se correlacionó con menor secreción de IFNγ y TNFα y menor expresión de CD107a en las células P VHB-específicas. El tratamiento in-vitro con IL-15 de las células VHB-específicas aumentó 6 veces el número de células MLP, aumentó su tamaño mitocondrial y disminuyó la expresión de Glut1, y mantuvo esta población elevada hasta el día 9 con una disminución progresiva en la fase de contracción. Este cambio en la población MLP se correlacionó con un aumento de la población P y sus funciones efectoras.Conclusión: El tratamiento in-vitro con IL-15 aumenta el número de células MLP y modifica su metabolismo hacia uno menos glicolítico lo que genera una P más abundante y con mejor capacidad efectora.

dianas 9(1) > Hernández etal

dianas | Vol 9 Num 1 | marzo 2020 | e202003b02

Ivabradine induces cardiac protection by preventing inflammatory response through inhibition of Cyclophilin-A secretion after myocardial ischemia/reperfusion injury.

Ignacio Hernández, Rafael Ramírez-Carracedo, Laura Tesoro, Javier Díez-Mata, Ricardo García, Paula Reventún, José Luis Zamorano, Marta Saura, Carlos Zaragoza

Hospital Universitario Ramón y Cajal IRYCIS/Universidad Francisco de Vitoria Unidad Mixta de Investigación Cardiovascular Crta. Madrid-Colmenar. 9, 100 Madrid, 28034, España.

a. ignacio.hernandez@ufv.es

V Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2020.
16-18 de marzo, 2020. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Keywords: EMMPRIN; Ciclofilina A; Ivabradina; Infarto Agudo de Miocardio (IAM); Insuficiencia Cardiaca Aguda (ICA); Remodelado;

Abstract

El remodelado cardiaco es un proceso fisiológico del desarrollo, adaptativo a cambios puntuales y transitorios del entorno, aunque de forma adversa sucede como mecanismo de compensación de la función cardiaca en el curso de diferentes patologías cardiovasculares, entre las que se incluye el infarto agudo de miocardio (IAM). La necrosis miocárdica dispara toda una serie de cambios bioquímicos, morfológicos y estructurales, encaminados a mantener unos niveles adecuados de perfusión tisular como forma de recuperación de la función contráctil perdida, que desembocan finalmente en desarrollo de insuficiencia cardiaca aguda (ICA), y cuyo origen, entre otras, reside en la activación de señales inflamatorias, en donde la degradación de la matriz extracelular es crucial en el proceso. De entre todos los factores implicados, nosotros describimos el papel que EMMPRIN (del inglés, Extracellular Matrix Metalloproteinase INducer, también conocido como CD147, o Basigina) ejerce en el disparo del remodelado adverso a través de la activación MMP-9 y MMP-13 en el miocardio. Otro de los factores decisivos en la etiología de la respuesta inflamatoria es la expresión de Ciclofilina A, especialmente importante para nosotros, ya que su receptor natural es precisamente EMMPRIN siendo su relación en el contexto del IAM poco conocida. De entre los distintos abordajes farmacológicos para el tratamiento de la ICA postinfarto, la Ivabradina por mecanismos aun por explorar, juega un papel decisivo, y por ello, en virtud de datos preliminares de nuestro laboratorio sobre la funcionalidad de EMMPRIN, en el presente trabajo nosotros postulamos que la Ivabradina ejerce un efecto cardioprotector en la ICA post-infarto mediante el control de Ciclofilina A, a través de la regulación del complejo que esta forma con EMMPRIN, controlando de esta forma el remodelado de la matriz extracelular, y postulando a EMMPRIN, como una nueva herramienta terapéutica en el control del remodelado cardiaco adverso.