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dianas 7 (1) Baz y Rivera-Arconada 2018 Estudio de los ritmos de actividad intrínseca en áreas sensoriales y motoras de la médula espinal de ratón.

dianas 7(1) > Baz y Rivera-Arconada

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803b32

Estudio de los ritmos de actividad intrínseca en áreas sensoriales y motoras de la médula espinal de ratón.

Departamento de Biología de Sistemas. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

ajorge.vb10@gmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión B3 – Fisiología

Resumen

En la médula espinal existen redes de interneuronas capaces de producir una actividad rítmica generando patrones de actividad implicados en determinados comportamientos, como puede ser la locomoción. Estos circuitos o redes se han denominado como centro generador de patrones (CGP) y funcionan sin la necesidad de información aferente o de un control descendente, por lo que se pueden estudiar utilizando aproximaciones in vitro. Mediante estudios con preparaciones de médula espinal aislada se ha observado una actividad rítmica espontánea (en ausencia de estimulación) en motoneuronas, que podría ser el reflejo de determinados patrones implicados en la locomoción. Pero también se ha observado actividad en aferentes primarias, donde se genera una actividad eferente hacia la periferia denominada reflejos de la raíz dorsal (DRR). Como ocurre con el reflejo axónico (AR), esta actividad puede producir la liberación de neuropéptidos en la periferia provocando la denominada inflamación neurogénica, lo que se ha relacionado con procesos de dolor crónico. El objetivo de este trabajo es caracterizar el funcionamiento de estos circuitos neuronales intraespinales en condiciones normales y en procesos de dolor inflamatorio. Utilizamos preparaciones de médula espinal in vitro de ratones neonatos y registros electrofisiológicos de la actividad espontánea en aferentes primarias y axones de motoneuronas. Para ello se utilizaron electrodos de succión de vidrio donde se introdujeron la raíz dorsal y ventral del segmento lumbar 4 del mismo lado. Además, estudiamos los posibles cambios en el funcionamiento de estas redes intraespinales en ratones sometidos a un tratamiento inflamatorio utilizando el modelo de carragenina intraplantar. También realizamos estudios farmacológicos para determinar que neurotransmisores pueden estar involucrados. En nuestros registros hemos identificado tres tipos diferentes de eventos: eventos coincidentes en ambas raíces, eventos que solo aparecen en los registros de raíz dorsal y eventos que aparecen solo en la raíz ventral. Los eventos coincidentes tienen una amplitud mayor que los demás, mientras que los eventos únicamente ventrales son los que aparecen con más frecuencia. Tras la inflamación periférica se incrementó el número de eventos que se observan solo en la raíz dorsal. El bloqueo de los receptores de glicina con estricnina 1 µM redujo la frecuencia de los eventos correlacionados y los eventos dorsales tanto en preparaciones de ratones naïve como inflamados. Sin embargo, no modificó el número de los eventos ventrales. Estas observaciones sugieren que cada tipo de actividad podría tener un origen distinto como indicaría la diferente sensibilidad a estricnina. El incremento del número de eventos que se observa solo en el registro de aferentes primarias después de la inflamación podría deberse a cambios en la excitabilidad de estos circuitos debidos a procesos de sensibilización central. La presencia de eventos correlacionados sugiere que las aferentes primarias y las motoneuronas deben disponer de alguna forma de intercomunicación o recibir información simultanea de estos generadores, lo que podría estar implicado en la integración de información a nivel espinal.

Cita: Baz, Jorge Vicente; Rivera Arconada, Iván (2018) Estudio de los ritmos de actividad intrínseca en áreas sensoriales y motoras de la médula espinal de ratón. Actas del III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018. 20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión B3 – Fisiología. dianas 7 (1): e201803b32. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201803b32 http://www3.uah.es/dianas?e201803b32. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

Copyright: © Baz JV, Rivera-Arconada I. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 7 (1) Santos etal 2018 Trampas Extracelulares de Neutrófilos (NETs) en trombos cardíacos: visualización y cuantificación mediante microscopía confocal.

dianas 7(1) > Santos etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803b34

Trampas Extracelulares de Neutrófilos (NETs) en trombos cardíacos: visualización y cuantificación mediante microscopía confocal.

Instituto de Investigación Sanitaria Puerta de Hierro - Segovia de Arana.

aadri.santos.bio@gmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión B3 – Fisiología
Premio a la mejor comunicación.

Resumen

Los neutrófilos son los leucocitos más abundantes en sangre y constituyen una parte esencial del sistema inmune innato, considerándose una de las primeras líneas de defensa frente a infecciones y daño tisular. Después de ser reclutados y activados en el sitio de inflamación pueden actuar través de los mecanismos de fagocitosis, degranulación, producción de citoquinas y liberación de Neutrophil Extracellular Traps (NETs). Los NETs se definen como estructuras de tipo red formadas por cromatina descondensada (histonas y ADN) y proteínas granulares y citoplasmáticas. La liberación de NETs da lugar a un tipo de muerte celular conocida con el nombre de NETosis, que consiste en una forma de defensa frente a bacterias, hongos, parásitos y virus, produciendo la detención de los patógenos y su destrucción gracias a la concentración de agentes antimicrobianos en el espacio extracelular. La desregulación del proceso de NETosis se ha relacionado con gran número de patologías autoinmunes, inflamatorias, metabólicas y cardiovasculares. En las enfermedades cardiovasculares concretamente, intervienen en el proceso de trombosis promoviendo la activación y la agregación plaquetaria, sirviendo de soporte a los eritrocitos, e induciendo la generación de trombina y el depósito de fibrina. Por todo ello, el análisis de NETs en muestras de tejido se ha convertido en un tema de gran interés para comprender su papel patológico en diversas enfermedades. En este trabajo hemos desarrollado un método semiautomático de visualización y cuantificación de NETs en muestras de aspirados de trombos intracoronarios embebidos en parafina. El estudio de la colocalización de las proteínas Mieloperoxidasa e Histona 3 Citrulinada, marca inequívoca de la presencia de NETs, mediante un doble marcaje con fluorescencia y la utilización de la técnica de Microscopía Confocal nos ha permitido analizar la presencia de NETs en trombos cardiacos. Se trata de un método de cuantificación fácilmente reproducible, que podría servir para estandarizar el estudio de NETs en muestras parafinadas y así poder comparar resultados obtenidos en distintos laboratorios.

Cita: Santos, Adrián; Martín, Paloma; Blasco, Ana; Solano, Jorge; García, Diego; Goicolea, Javier; Bellas, Carmen; Coronado, María José (2018) Trampas Extracelulares de Neutrófilos (NETs) en trombos cardíacos: visualización y cuantificación mediante microscopía confocal. Actas del III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018. 20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión B3 – Fisiología. Premio a la mejor comunicación. dianas 7 (1): e201803b34. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201803b34 http://www3.uah.es/dianas?e201803b34. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

Copyright: © Santos A, Martín P, Blasco A, Solano J, García D, Goicolea J, Bellas C, Coronado MJ. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 7 (1) García-Pastor etal 2018 Papel de la iPGE2 en la muerte celular mediada por hipoxia en células proximales tubulares.

dianas 7(1) > García-Pastor etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803b24

Papel de la PGE2 intracelular en la muerte celular mediada por hipoxia en células proximales tubulares

1. Departamento de Biología de Sistemas. Universidad de Alcalá.  2. Departamento de Biología. Universidad Autónoma de Madrid.

acoralgarciapastor@gmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión B2 – Fisiología

Resumen

La Prostagladina E2 (PGE2), producida por la acción de la enzima inducible ciclooxigenasa 2 (COX-2) y la ciclooxigenasa 1(COX-1) constitutiva, actúa a través de los receptores EP (EP1, EP2, EP3 y EP4), localizados en la membrana plasmática y es la principal prostaglandina a nivel renal. Recientemente, nuestro grupo ha demostrado la presencia de receptores EP intracelulares (iEPR) responsables de múltiples efectos producidos por la PGE2 y que son prevenidos al tratar con bromosulfoftaleina (BS), un inhibidor del trasportador intracelular de PGE2 La hipoxia es un factor patogénico muy frecuente para el desarrollo de patologías como la insuficiencia renal aguda o crónica. Las células tubulares proximales humanas (CPT) son altamente susceptibles a la hipoxia debido a su elevada demanda de O2 producida por su gran actividad metabólica. Con estos antecedentes, nos propusimos estudiar el papel de la PGE2 intracelular en la muerte inducida por hipoxia (1% O2, 24h) en CPT. La hipoxia produjo i) un aumento de la expresión de caspasa 3 y anexina V (medidas mediante western blot y citometría de flujo), que son cambios característicos de la apoptosis y ii). Un aumento por mecanismos transcripcionales de la expresión de COX-2, así como de los niveles intracelulares de PGE2. El aumento de la anexina V fue prevenido por la inhibición de COX-2, el antagonismo de los receptores EP, el tratamiento con BS y con antagonistas de MEK-1 y p38 (dos quinasas estrechamente relacionadas con la regulación de COX-2). Estos datos sugieren que la muerte producida por hipoxia en CPT está mediada por los niveles de PGE2 intracelular y que la inhibición del transportador responsable de su captación por las CPT podría constituir una nueva estrategia terapéutica para el tratamiento de la apoptosis de CPT inducida por hipoxia en diferentes patologías.

Cita: García-Pastor, Coral; Benito-Martínez, Selma; Fernández-Martínez, Ana Belén; Lucio-Cazaña, Francisco Javier (2018) Papel de la PGE2 intracelular en la muerte celular mediada por hipoxia en células proximales tubulares. Actas del III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018. 20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión B2 – Fisiología. dianas 7 (1): e201803b24. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201803b24 http://www3.uah.es/dianas?e201803b24. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

Copyright: © García-Pastor C, Benito-Martínez S, Fernández-Martínez AB, Lucio-Cazaña FJ. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 7 (1) Sanchez etal 2018 Role of unfolding protein response in vascular damage by BPA exposure.

dianas 7(1) > Sanchez etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803b23

Role of unfolding protein response in vascular damage by BPA exposure.

asandrasanchez07@hotmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión B2 – Fisiología

Resumen

Bisphenol A (BPA) is an organic compound used in the manufacturing of polycarbonate plastics. It is presents in various consumer goods such as food containers, baby and water bottles, and its potential risk to human health has been well characterized. Several epidemiological studies have associated urinary and serum BPA levels in human with various types of cardiovascular diseases including hypertension, heart attack and coronary and peripheral arterial disease. Chronic exposure to BPA has been shown to result in vascular remodelling, atherosclerosis, and altered blood pressure in rodents. In previous studies, we observed that BPA exposure leads to endothelial dysfunction and hypertension in mice by uncoupling eNOS activity, leading to oxidative and nytrosative stress through accumulation of reactive oxygen species (ROS) (Saura et al., 2014). However, molecular mechanisms of BPA toxicity in vascular system are widely unknown. The activation of Unfolding Protein Response (UPR) signaling pathways aims to cope with the stress and plays a pro-survival role in the early stage of atherosclerosis. We propose that BPA induce apoptosis secondary to a prolonged and enhanced (UPR) activation causing tissues damage. To this aim, BPA was orally administrated to mice (150ug/ml in drinking water) for 4 months. We observe vascular remodelling in BPA treated mice comparing to controls. These damages are accompanied by lipid peroxidation, associated with stress, activation of UPR and an extended apoptosis. These results suggest that UPR signalling has an important role in BPA toxicity.

Cita: Sanchez, S; Reventun, P; Cuadrado, I; Ramirez, R; Saura, M (2018) Role of unfolding protein response in vascular damage by BPA exposure. Actas del III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018. 20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión B2 – Fisiología. dianas 7 (1): e201803b23. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201803b23 http://www3.uah.es/dianas?e201803b23. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

Copyright: © Sanchez S, Reventun P, Cuadrado I, Ramirez R, Saura M. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 7 (1) Reventún etal 2018 Pathological alterations of cardiac functions and morphology in mice treated with BPA.

dianas 7(1) > Reventún etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803b22

Pathological alterations of cardiac functions and morphology in mice treated with BPA.

areventuntorralba@gmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión B2 – Fisiología

Resumen

Bisphenol A (BPA) is an organic compound used in the manufacturing of polycarbonate plastics. It is presents in various consumer goods and its potential risk to human health has been well characterized. Several epidemiological studies have associated urinary and serum BPA levels in human with various types of cardiovascular diseases including hypertension, heart attack and coronary and peripheral arterial disease. However, molecular mechanisms of BPA toxicity in cardiac functions are widely unknown. To shed light on these processes we treat mice with low doses of BPA orally administrated in drinking water (150ug/ml) for four months. We found important echocardiography and electrocardiography alterations, showing a possible heart failure with diminish of ejection fraction and lost of ventricular contractility. Likewise, heart structure was affected presenting edema, hemorrhagic lesions and clot formations as well as inflammatory alterations. We propose that this process could be developed by the inadequate activation of Unfolding Protein Response as a consequence of BPA exposure and we demonstrated it by the study of the whole pathway. These results suggest an important and relevant toxic effect of BPA in heart physiology.

Cita: Reventún, P; Sánchez, S; Cuadrado, I; Ramirez, R; Saura, M (2018) Pathological alterations of cardiac functions and morphology in mice treated with BPA. Actas del III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018. 20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión B2 – Fisiología. dianas 7 (1): e201803b22. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201803b22 http://www3.uah.es/dianas?e201803b22. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

Copyright: © Reventún P, Sánchez S, Cuadrado I, Ramirez R, Saura M. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 7 (1) Lucas-Romero y López-García 2018 Actividad espontánea en el asta dorsal de la médula espinal y sus mecanismos subyacentes.

dianas 7(1) > Lucas-Romero y López-García

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803b31

Actividad espontánea en el asta dorsal de la médula espinal y sus mecanismos subyacentes.

Departamento de Biología de Sistemas UAH, Edificio de Medicina, Universidad de Alcalá, Campus Universitario, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.

ajavierdelucas7@hotmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión B3 – Fisiología

Resumen

Las láminas superficiales de la médula espinal constituyen el primer punto de relevo y procesamiento de la información nociceptiva. La mayoría de las neuronas que aquí se encuentran son interneuronas de circuito local, algunas de las cuales disparan de manera espontánea con unos patrones característicos. Es probable que cada patrón esté mediado por corrientes iónicas específicas. Estos patrones pueden constituir un elemento clave en el código neural, que puede cambiar en situación de dolor crónico. Utilizando una rodaja longitudinal de médula espinal in vitro se han registrado mediante matrices de microelectrodos (MEAs) neuronas en láminas superficiales que presentaban actividad espontánea. Asimismo, se evaluó el posible automatismo de los patrones de disparo y la participación de la corriente Ih y la corriente persistente de sodio en el mantenimiento de alguno de estos ritmos. Las neuronas se clasificaron en función de su patrón de actividad espontánea (dependiendo de su regularidad, presencia o no de ráfagas y frecuencia de disparo). Se observó que las neuronas con un patrón regular son particularmente resistentes al bloqueo sináptico. Esto parece indicar que dichos patrones de disparo tienen un importante componente intrínseco. Además, el bloqueo específico de la corriente Ih y de la corriente persistente de sodio produjo una inhibición completa de la actividad espontanea en muchas de estas neuronas, indicando un papel relevante de estas conductancias en el mantenimiento de los ritmos intrínsecos.

Cita: Lucas-Romero, Javier; López-García, José Antonio (2018) Actividad espontánea en el asta dorsal de la médula espinal y sus mecanismos subyacentes. Actas del III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018. 20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión B3 – Fisiología. dianas 7 (1): e201803b31. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201803b31 http://www3.uah.es/dianas?e201803b31. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

Copyright: © Lucas-Romero J, López-García JA. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 7 (1) Asenjo-Bueno etal 2018 Efecto de la hiperfosfatemia en la génesis de fibrosis vascular en el envejecimiento.

dianas 7(1) > Asenjo-Bueno etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803b11

Efecto de la hiperfosfatemia en la génesis de fibrosis vascular en el envejecimiento.

1. Servicio de Nefrología y Fundación para la Investigación Biomédica del Hospital Universitario Príncipe de Asturias, Alcalá de Henares, España.  2. Departamento de Biología de Sistemas, Universidad de Alcalá, Alcalá de Henares, España.  3. Red Renal (REDinREN), Instituto de Salud Carlos III, Madrid, España.  4. Instituto Reina Sofía de Investigación Renal (IRISIN), Madrid, España.

aluaasbu19@gmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión B1 – Fisiología

Resumen

INTRODUCCIÓN Y OBJETIVO. La hiperfosfatemia aparece secundariamente en los pacientes con enfermedad renal crónica, que presentan complicaciones cardiovasculares asociadas a mayor mortalidad y signos de envejecimiento prematuro. Este estudio plantea establecer la relación entre hiperfosfatemia, envejecimiento y eventos cardiovasculares, evaluando concretamente el desarrollo de fibrosis vascular. MATERIALES Y METODOS. Para ello, se tratan dos tipos celulares básicos en la estructura vascular, células endoteliales (CE) y células musculares lisas (CML) humanas con un donador de fosfato llamado beta-glicerofosfato (BGP), a distintos tiempos. La producción de ROS se analizó por microscopia confocal mediante una sonda fluorescente CellROX. Para los estudios in vivo se utilizaron ratones C57/BL6 jóvenes de 5 meses y viejos de 24 meses. La fibrosis se estudió por la expresión de TGF-ß y fibronectina-1 (FN) por western blot, tanto en células como en tejidos vasculares, y por la tinción de rojo sirio en tejidos. Los niveles de fósforo séricos en ratones fueron determinados por métodos colorimétricos. RESULTADOS. El tratamiento con BGP en CE y CML indujo un aumento en ambas proteínas fibróticas, TGF-ß y FN. Además, se comprobó que el BGP era capaz de aumentar la producción de radicales libres (ROS) a tiempos cortos. Así mismo, se pudo observar que el antioxidante N-Acetil cisteina (NAC) bloqueó los efectos del BGP, sugiriendo que los ROS estaban implicados en la fibrosis inducida por BGP en las células. Se realizaron estudios in vivo en ratones jóvenes y viejos para corroborar los resultados encontrados in Vitro. Los ratones viejos poseían niveles mayores de fósforo sérico respecto a los jóvenes. En general, los ratones viejos presentan mayor grado de fibrosis en diferentes tejidos vasculares como aorta, pulmón y corazón; que fue medida mediante expresión proteica de FN, TGF-ß y por tinción de las fibras de colágeno con Rojo Sirio. DISCUSION. En resumen, podemos concluir que existe una relación entre el envejecimiento y la hiperfosfatemia, siendo ésta una de las posibles causas del desarrollo de fibrosis vascular. Uno de los mecanismos implicados podría ser la mayor producción de ROS por parte del BGP, pero más estudios son necesarios.

Cita: Asenjo-Bueno, Ana; Sosa, Patricia; Alcalde-Estévez, Elena; Serrano-García, Lucía; Plaza, Patricia; Rodríguez-Puyol, Diego; Olmos, Gemma; Ruíz-Torres, María Piedad; López-Ongil, Susana (2018) Efecto de la hiperfosfatemia en la génesis de fibrosis vascular en el envejecimiento. Actas del III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018. 20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión B1 – Fisiología. dianas 7 (1): e201803b11. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201803b11 http://www3.uah.es/dianas?e201803b11. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

Copyright: © Asenjo-Bueno A, Sosa P, Alcalde-Estévez E, Serrano-García L, Plaza P, Rodríguez-Puyol D, Olmos G, Ruíz-Torres MP, López-Ongil S. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 7 (1) Alcalde-Estévez etal 2018 La endotelina 1 induce fibrosis en células de músculo estriado de ratón.

dianas 7(1) > Alcalde-Estévez etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803b13

La endotelina 1 induce fibrosis en células de músculo estriado de ratón.

1. Departamento de Biología de Sistemas, Universidad de Alcalá, Alcalá de Henares, España.  2. Servicio de Nefrología y Fundación para la Investigación Biomédica del Hospital Universitario Príncipe de Asturias, Alcalá de Henares, España.  3. Red Renal (REDinREN), Instituto de Salud Carlos III, Madrid, España.  4. Instituto Reina Sofía de Investigación Renal (IRISIN), Madrid, España.

aelena_22_93@hotmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión B1 – Fisiología

Resumen

INTRODUCCIÓN Y OBJETIVO: El envejecimiento se caracteriza por un decline progresivo de las funciones fisiológicas de varios órganos y sistemas. Durante este proceso fisiológico del organismo, se ve alterado el equilibrio de la liberación y/o actividad de las sustancias secretadas por el endotelio, entre las que se encuentra la endotelina 1 (ET-1). La ET-1 es el péptido vasoconstrictor más potente conocido hasta la fecha y se ha descrito que contribuye al desarrollo de fibrosis tisular en distintos tipos celulares. En resultados previos de nuestro grupo de investigación, se ha descrito un incremento de la presencia de fibrosis en el músculo estriado de ratones envejecidos, así como de los niveles de ET-1 circulantes en plasma, en comparación con sus controles jóvenes. Además, se demostró la presencia de receptores para la ET-1 en células murinas de músculo esquelético en cultivo. Por todo ello, el objetivo de este estudio es examinar si la ET-1 puede causar directamente fibrosis en células de músculo esquelético, analizando la expresión de factores fibrogénicos en el cultivo de mioblastos murinos. MATERIALES Y MÉTODOS: Se realizaron experimentos en mioblastos de ratón C2C12 en presencia y ausencia de ET-1 a diferentes tiempos, estudiándose su efecto sobre la expresión de proteínas fibróticas, así como los posibles mecanismos implicados en dicha expresión mediante la administración de diversos inhibidores. El desarrollo de fibrosis se analizó mediante la medición de proteínas fibróticas como fibronectina (FN) y el factor de crecimiento transformante beta (TGF-β) con las técnicas de western-blot, inmunofluorescencia, RT-qPCR y ELISA. RESULTADOS: La ET-1 induce fibrosis en mioblastos al aumentar la producción de TGF-β y de FN. Los ensayos con antagonistas específicos de los receptores de ET-1, ETA (BQ123) Y ETB (BQ788) confirmaron que el efecto de la ET-1 era mediado por la unión a su receptor ETA y no al receptor ETB. Está descrito que la ET-1 vía receptor ETA activa la vía PI3K-AKT-GSK, que interviene en distintas respuestas celulares. Con el fin de estudiar el mecanismo de acción de la ET-1 sobre la respuesta fibrótica en mioblastos, se demostró la participación de dicha vía mediante la administración de diferentes inhibidores farmacológicos de dicha vía. Además, también se comprobó el papel de la producción de radicales libres (ROS) inducida por ET-1 en la expresión de factores fibróticos mediante la incubación de mioblastos en presencia de antioxidantes (N-acetilcisteína y DPI), observándose que el desarrollo de fibrosis se veía reducido cuando se administraban dichos antioxidantes. DISCUSIÓN: Por tanto, podemos concluir que la ET-1 a través de su receptor ETA posee un efecto directo sobre fibrogénesis en el cultivo de mioblastos mediado por la vía de PI3K-AKT-GSK y la producción de radicales libres. Estos resultados nos sugieren que el aumento de la ET-1 circulante observado durante el envejecimiento sería uno de los factores que influyen en el desarrollo fibrosis en el músculo esquelético.

Cita: Alcalde Estévez, Elena; Asenjo-Bueno, Ana; Sosa, Patricia; Plaza, Patricia; Serrano, Lucía; Rodríguez-Puyol, Diego; Olmos, Gemma; Ruíz-Torres, María Piedad; López-Ongil, Susana (2018) La endotelina 1 induce fibrosis en células de músculo estriado de ratón. Actas del III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018. 20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión B1 – Fisiología. dianas 7 (1): e201803b13. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201803b13 http://www3.uah.es/dianas?e201803b13. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

Copyright: © Alcalde-Estévez E, Asenjo-Bueno A, Sosa P, Plaza P, Serrano L, Rodríguez-Puyol D, Olmos G, Ruíz-Torres MP, López-Ongil S. Algunos derechos reservados. Este es un artículo open-access distribuido bajo los términos de una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 4.0 Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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dianas 7 (1) Bernal y Roza 2018 Caracterización de neuronas marcadas retrógradamente en ganglios de la raíz dorsal y nervios periféricos transparentes de ratón.

dianas 7(1) > Bernal y Roza

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803

Caracterización de neuronas marcadas retrógradamente en ganglios de la raíz dorsal y nervios periféricos transparentes de ratón.

Universidad de Alcalá.

alaura.bernal@uah.es

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión

Resumen

Traditional molecular characterization of neurons is based on doing immunohistochemistry in frozen sections, but this technique is slow and time-consuming. The use of confocal microscopy in un-sectioned tissue samples is not posible due to light scattering, an issue overcome in transparent samples. Several protocols have been developed in the last years, but none of them is adapted to peripheral nervous tissue. We modified the previous protocols for lipids-clearing for a new low-cost passive lipids-clearance suitable for labs with basic equipment. First, we showed that this passive technique is able to make transparent different tissues from the peripheral nervous system (dorsal root ganglia and peripheral nerves) in a short period of time (10-12 days). We successfully stablished an immunohistochemistry protocol for transparent tissue. We test the suitability of different retrograde tracers (DiI, fluoro-ruby, fluoro-emerald, fluoro-gold and retrobeads) to remain in the tissue after lipid-clearing. Moreover, characterization of retrograde labelled neurons by immunohistochemistry (against the nociceptors’ markers isolectin-IB4 and calcitonin gene-related peptide) is also possible.

Cita: Bernal, Laura; Roza, Carolina (2018) Caracterización de neuronas marcadas retrógradamente en ganglios de la raíz dorsal y nervios periféricos transparentes de ratón. Actas del III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018. 20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión. dianas 7 (1): e201803. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201803 http://www3.uah.es/dianas?e201803. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

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dianas 7 (1) Sosa etal 2018 La endotelina-1 produce fibrosis y pérdida de función muscular en ratones viejos.

dianas 7(1) > Sosa etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803b14

La endotelina-1 produce fibrosis y pérdida de función muscular en ratones viejos.

1. Universidad de Alcalá, Departamento de Biología de Sistemas, Alcalá de Henares, España.  2. Fundación para la Investigación Biomédica del Hospital Universitario Príncipe de Asturias, Alcalá de Henares, España.  3. RedinRen, Instituto de Salud Carlos III, Madrid, España.  4. Instituto Reina Sofía de Investigación Renal (IRISIN), Madrid, España.

apatricia.sosacalle@gmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión B1 – Fisiología

Resumen

INTRODUCCIÓN Y OBJETIVO. En estudios previos de nuestro grupo se observó que altas concentraciones de fosfato extracelular inducía senescencia a nivel endotelial a través de un incremento en los niveles de endotelina-1 (ET-1). El objetivo de este estudio es analizar si la fibrosis que da lugar a la pérdida de función muscular en ratones viejos es producida por el aumento de la ET-1 circulante.

MATERIALES Y METODOS. Para este estudio se utilizaron ratones C57/BL6 jóvenes (5 meses) y viejos (24 meses). Todos los ratones fueron alimentados con una dieta normal que contiene un 0.6 % de fósforo. Los ratones viejos fueron divididos en tres grupos a partir de los 21 meses, y siguieron distintas dietas durante los últimos 3 meses: un grupo control que siguió con la dieta normal, otro grupo alimentado con dieta hipofosfatémica conteniendo un 0.2 % de fósforo y otro grupo alimentado con dieta normal más un antagonista de la endotelina, Bosentán 30 mg/Kg/día, disuelto en el agua de bebida. durante los siguiente 3 meses. Los niveles de fósforo y de ET-1 en suero se midieron mediante kits comerciales. Para estudiar la fibrosis se realizaron western-blot de las proteínas pro-fibróticas como TGF-ß y fibronectina (FN), en diferentes músculos, así como la tinción de fibras de colágeno con Rojo Sirio en gemelo y tibial. La pérdida de función muscular se estudió mediante la medida de la fuerza utilizando dos tipos de test: el test de agarre y la electroestimulación percutánea del nervio peróneo común.

RESULTADOS. Se observó un incremento significativo en los niveles de fósforo y de ET-1 séricos en ratones viejos respecto a los jóvenes. Los niveles de fósforo sérico bajaron significativamente en ratones alimentados con la dieta hipofosfatémica, mientras que los valores de ET-1 bajaron tanto en ratones con dieta hipofosfatémica como en ratones tratados con Bosentán. Los niveles de FN en animales viejos aumentaron significativamente con respecto a los jóvenes en cuádriceps y gemelo, este aumento se revierte tras el tratamiento con la dieta baja en fósforo y con el Bosentán. No se observaron cambios significativos en los niveles de TGF-ß. La intensidad de rojo sirio aumenta significativamente en animales viejos y se observa una reversión de la misma en los ratones tratados con dieta hipofosfatémica, pero no en los tratados con Bosentán. Los ratones viejos también mostraron una disminución en la fuerza de las extremidades anteriores, así como una disminución de la fuerza máxima y específica en el músculo tibial con respecto a los ratones jóvenes, estos valores se revirtieron en los ratones con dieta hipofosfatémica.

DISCUSION. Elevados niveles de ET-1 y fosfato sérico producen fibrosis a nivel del músculo esquelético, generando una disfunción muscular que produce un envejecimiento acelerado. Los resultados sugieren que la hiperfosfatemia por sí misma y a través de la inducción de los niveles de ET-1 estaría potenciando la disfunción muscular a través de la aparición de fibrosis, siendo de esta forma, uno de los factores que influyen en la aparición de sarcopenia.

Cita: Sosa, Patricia; Alcalde, Elena; Plaza, Patricia; Asenjo, Ana; Rodríguez-Puyol, Manuel; Olmos, Gemma; López-Ongil, Susana; Ruíz-Torres, María Piedad (2018) La endotelina-1 produce fibrosis y pérdida de función muscular en ratones viejos. Actas del III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018. 20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España. Sesión B1 – Fisiología. dianas 7 (1): e201803b14. ISSN 1886-8746 (electronic) journal.dianas.e201803b14 http://www3.uah.es/dianas?e201803b14. URI http://hdl.handle.net/10017/15181

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