Dianas 2(2) > García-Centeno y Coello-Molinero

Dianas | Vol 2 Num 2 | septiembre 2013 | e20130903

Aislamiento, purificación y elucidación de productos naturales con actividad antitumoral a partir de organismos marinos. Axinyssmide A y Axinyssmide C.

Antonio García Centeno^1, 2, a, Laura Coello Molinero²

1. Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina,Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. PharmaMar, Avenida de los Reyes, 1, Polígono Industrial La Mina Norte, 28770, Colmenar Viejo, Madrid, España.

a. antonio.garcen@hotmail.com

Palabras clave: aislamiento; Axinyssmide; cáncer; citotoxicidad; cromatografía; resonancia magnética nuclear; productos naturales

Resumen

PharmaMar es una compañía biofarmacéutica dedicada a la investigación y desarrollo de medicamentos innovadores de origen marino para el área terapéutica de oncología. Concretamente el departamento de Productos Naturales es el encargado del aislamiento y la elucidación de moléculas con actividad citotóxica. En esta memoria se va a exponer todo el proceso de aislamiento de estas moléculas. Partiendo del organismo marino se va a detallar la extracción del mismo, el fraccionamiento y purificación por técnicas cromatográficas, así como la caracterización de dichas moléculas por resonancia magnética nuclear y espectrometría de masas. Concretamente se expondrá todo el proceso basándose en el ejemplo de dos moléculas, la Axinyssmide A y la Axinyssmide C extraídas de la esponja Axinyssa que se recogió en Dili y que poseen una citotoxicidad moderada.

Dianas 2(2) > Del-Monte-Monge etal

Dianas | Vol 2 Num 2 | septiembre 2013 | e20130902

Regulación de la expresión de lamina A/C en la célula T y su papel en la diferenciación de CD4 naïve a célula efectora.

Alberto Del Monte Monge, Marta Blanco Berrocal, José María González Granado, Vicente Andrés

1. Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina,Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Departamento de Epidemiología, Aterotrombosis e Imagen, Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares (CNIC), 28029 Madrid, España.

a. a.delmontemonge@gmail.com

Palabras clave: Lamina A/C; linfocito T; diferenciación; proliferación; activación

Resumen

La lamina A/C es una proteína nuclear con funciones estructurales y de regulación de la señalización celular y la transcripción de genes pero no se ha estudiado en detalle su papel en el sistema inmune. Los linfocitos T CD4+ naïve reconocen un antígeno presentado por una célula presentadora de antígeno (APC), se activan, proliferan y se diferencian a células efectoras para llevar a cabo funciones de respuesta inmune adaptativa. En la activación del linfocito T se producen eventos de señalización celular y transcripción de genes. Estudios previos en el laboratorio han mostrado que la lamina A/C se expresaen el linfocito T tras el reconocimiento de un antígeno para regular el grado de activación posterior del linfocito T. Como continuación, en este estudio se ha pretendido conocer las vías de señalización implicadas en la expresión de lamina A/C en el linfocito T así como establecer un posible papel de la lamina A/C en el proceso de diferenciación del linfocito T naïve a célula T efectora (Th). Para ello, con técnicas de citometría e inmunofluorescencia se ha analizado la expresión de lamina A/C en células T CD4+ de ratón estimulados a diferentes tiempos con y sin inhibidores de diferentes vías de señalización. Estos experimentos han mostrado una expresión transitoria de lamina A/C con un máximo a un día tras laestimulación así como un posible papel las vías de Src quinasas y de MAPK: ERK1/2 y p38 en esta inducción. El análisis por citometría de ensayos de activación, proliferación y diferenciación in vitro de células T CD4+ naïve de ratones WT y deficientes en lamina A/C ha mostrado que la lamina A/C tiene un papel fundamental en el proceso de diferenciación de la célula T CD4+naïve a Th1.

Dianas 2(2) > Bousoño-Rubio

Dianas | Vol 2 Num 2 | septiembre 2013 | e20130901

Obtención de fármacos antitumorales a partir de organismos de origen marino: Jaspamida, un péptido procedente de la esponja Jaspis sp.

Virginia Bousoño Rubio

Unidad de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina,Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.; Departamento de Química de Productos Naturales, PharmaMar S.A., 28770 Colmenar Viejo, Madrid, España.

virginia.bousono@gmail.com

Palabras clave: Actividad citotóxica; Jaspis sp.; Jaspamida; HPLC; NMR; Elucidación estructural

Resumen

El cáncer es la segunda causa de mortalidad en Europa y Estados Unidos. Aunque el índice de supervivencia ha mejorado en los últimos años, muchas de las variantes de esta enfermedad aún no tienen cura, por lo que es necesario el descubrimiento y desarrollo de nuevos agentes terapéuticos para combatirla. En la actualidad existe un creciente interés en la búsqueda de moléculas de potencial actividad procedentes del mar, ya que la gran diversidad química y biológica del medio marino es un amplio recurso para la búsqueda de nuevos fármacos antitumorales. El hecho de que el número de fármacos de origen marino descubiertos vaya en aumento se debe a la producción de metabolitos secundarios por parte de los organismos, los cuales han demostrado tener gran valor como agentes citotóxicos. Entre los distintos grupos taxonómicos marinos destaca el de las esponjas (filo Porifera), en el que se han centrado la mayoría de los estudios hasta la actualidad, por su elevada producción de metabolitos secundarios. En el presente estudio se describe el proceso de aislamiento y purificación mediante técnicas cromatográficas, valoración de actividad antitumoral y elucidación estructural mediante resonancia magnética nuclear de la jaspamida a partir de una muestra de Jaspis sp. tomada en Tomori. Son muchos los estudios que avalan el potencial antitumoral de la jaspamida en numerosas líneas celulares de cáncer. El proceso se llevó a cabo en el Departamento de Química de Productos Naturales de PharmaMar, compañía farmacéutica líder en el descubrimiento de tratamientos de origen marino contra el cáncer.

Dianas 2(1) > Madrigal-Martínez etal

Dianas | Vol 2 Num 1 | marzo 2013 | e20130307

Implicación de PGE₂ intracelular en cáncer de próstata.

Antonio Madrigal Martínez, Francisco Javier de Lucio Cazaña, Ana Belén Fernández Martínez

Dpto Fisiología, Facultad de Medicina, Universidad de Alcalá, Ctra. Madrid-Barcelona km 33,6. 28871, Alcalá de Henares, Madrid.

a. antoniomadrigalmartinez@gmail.com  b. javier.lucio@uah.es

Palabras clave: cáncer próstata; PGE2 intracelular HIF-1α; VEGF; proliferación celular; migración

Resumen

El cáncer de próstata es la segunda causa de muerte por cáncer en varones y hasta la fecha, no existe ningún tratamiento eficaz en los estadios más avanzados de la enfermedad, haciendo necesaria la búsqueda de nuevas estrategias de tratamiento. En el presente trabajo se analiza la acción de la PGE2 en el desarrollo del cáncer de próstata. Estudios previos de nuestro grupo de investigación han demostrado que la PGE2 intracelular induce el aumento de la expresión de VEGF a través del factor inducible por hipoxia o HIF-1α en células HK-2, estos dos factores tienen una gran importancia en desarrollo tumoral, por ello nos propusimos analizar las acciones de la PGE2 en cáncer de próstata. Los resultados indican que la PGE2 intracelular induce la proliferación y migración de las células PC3, la expresión del factor inducible por hipoxia o HIF-1α y del principal factor proangiogénico VEGF, promoviendo la superviviencia celular y la angiogénesis, por este motivo proponemos una nueva terapia basada en inhibir el acceso de PGE2 al interior celular, lo que supondría eliminar únicamente la actividad tumorigénica de PGE2, preservando sus efectos fisiológicos.

Dianas 2(1) > Velando-Crespo y Sánchez-Morales

Dianas | Vol 2 Num 1 | marzo 2013 | e20130308

Pirfenidona, un nuevo fármaco para el tratamiento de la fibrosis pulmonar idiopática.

Alejandro Velando Crespo, Santiago Sánchez Morales

1. Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Universidad Alcalá, Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Intermune VP Director médico.

a. avelando@intermune.com  b. ssanchez@intermune.com

Resumen

InterMune es una empresa multinacional, farmaceútica, biotecnológica dedicada a la investigación y comercialización de fármacos. En concreto, se trabaja actualmente en la comercialización de un nuevo fármaco, Pirfenidona, autorizado a principios de 2011 por la Agencia Europea del Medicamento (EMA). Pirfenidona es un fármaco antifibrótico, con propiedades antiinflamatorias. Recientemente se ha demostrado que reduce el declive de la función pulmonar en los pacientes con Fibrosis Pulmonar Idiopática (FPI) y retarda la progresión de la enfermedad. Aunque no se conoce bien el mecanismo de acción en humanos, más de 40 publicaciones preclínicas describen el mecanismo de acción antifibrótico y antiinflamatorio de Pirfenidona, y en modelos animales se ha demostrado que reduce la fibrosis enpulmón, hígado, corazón y riñón. Dicha actividad antifibrótica en estos modelos animales proporcionó la base preclínica para investigar su eficacia clínica en la FPI y para realizar estudios adicionales en otras enfermedades con un significativo componente fibrótico. La eficacia clínica de Pirfenidona se comprobó en tres principales estudios de Fase III, multicéntricos, aleatorizados, doble ciego, comparativos conplacebo realizados en pacientes con FPI. Dos de los cuales fueron realizados por InterMune en EE.UU., UE y Australia, llamados 004 (CAPACITY 2) y 006 (CAPACITY 1).

Dianas 2(1) > Marcos-Zambrano etal

Dianas | Vol 2 Num 1 | marzo 2013 | e20130301

Candida y candidiasis invasora: estudio de la actividad antifúngica in vitro de arasertaconazol frente a cepas clínicas de Candida y caracterización molecular de cepas productoras de candidemia relacionada con el catéter

Laura Marcos-Zambrano, Pilar Escribano, Sandra Recio, Jesús Guinea

1. Servicio de Microbiología Hospital Gregorio Marañón.  2. Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Medicina, Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.

a. lauraj.marcos@gmail.com

Palabras clave: candidiasis invasora; arasertaconazol; genotipado; microsatélites; short tandem repeats

Resumen

La infección por Candida es un problema de salud pública que abarca desde alteraciones de la flora normal hasta infecciones sistémicas graves en pacientes inmunosuprimidos o portadores de catéteres intravasculares. El tratamiento de la candidiasis sistémica se basa en la administración de un tratamiento antifúngico correcto junto con la retirada del catéter intravascular, si se demuestra que éste es el origen de la infección. El aumento de cepas portadoras de resistencia antifúngica hace necesario el desarrollo de nuevos fármacos para tratar la candidiasis; uno de los fármacos más novedosos es el arasertaconazol nitrato. En este proyecto se estudió la actividad antifúngica de arasertaconazol frente a aislados clínicos de Candida, así como el establecimiento de rangos de CMI aceptables con cepas de colección ATCC según los estándares establecidos en el documento CLSI M27-A3. Por otra parte, para estudiar si el catéter era el origen de la candidemia, se estudió la presencia de genotipos idénticos en muestras de sangre y catéter aislados simultáneamente en pacientes con candidemia y portadores de catéter intravascular. El otro objetivo del proyecto fue recoger prospectivamente y genotipar mediante el análisis de microsatélites las cepas mencionadas pertenecientes a las especies C. albicans y C. parapsilosis.

Dianas 2(1) > Bejarano-Prudencio

Dianas | Vol 2 Num 1 | marzo 2013 | e20130302

Cell-Based High-Throughput Screening Assay for Identification of G-Protein-Coupled Receptors Agonists and Antagonists.

Alberto Bejarano Prudencio

GlaxoSmithKline R&D Pharmaceuticals, Screening and Compound Profiling. Centro de Investigación Básica (C.I.B.) Santiago Grisolía, 4. 28760 Tres Cantos (Madrid).

albertobejarano@hotmail.com

Palabras clave: Ca²⁺ mobilization; GPCRs; FLIPR; fluorescent Ca²⁺ dye; high-throughput screening

Resumen

The GPCRs are the target of a significant portion of all approved drugs and also represent an important parcel of potential drug targets for new indications. Activation of GPCRs can be detected by the utilization of functional cell-based assays like measuring transient intracellular calcium mobilization. The emergence of the fluorescent imaging plate reader and Ca²⁺-sensitive fluorescent dyes has made the high-content screening of GPCR possible. Here was applied a dual automated FLIPR platform to testing a large collection of compounds to identification of both agonist and antagonists form a single screen of GPCR.

Dianas 2(1) > Cano-Peñalver etal

Dianas | Vol 2 Num 1 | marzo 2013 | e20130303

Regulación de la filtración glomerular por la matriz extracelular: implicación de la kinasa ligada a integrinas en la vía del NO/GMPc.

José Luis Cano Peñalver, Sergio de Frutos García, Mercedes Griera Merino, Manuel Rodríguez Puyol

Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina, Universidad de Alcalá, Crta. Madrid-Barcelona Km 33,600 Alcalá de Henares, 28871 Madrid, España.

a. jose.cano@edu.uah.es  b. manuel.rodriguez@uah.es

Palabras clave: matriz extracelular; kinasa ligada a integrinas; óxido nítrico; guanilato ciclasa soluble; ; proteína kinasa dependiente de GMPc; taquifilaxia

Resumen

El proceso de vasodilatación del eje óxido nítrico (NO)/guanilato ciclasa soluble(GCs)/GMPc/proteína kinasa dependiente de GMPc (PKG) permite regular la filtración glomerular en el riñón. En las patologías renales crónicas se producen cambios cuantitativos y cualitativos de matriz extracelular (MEC), que mediante la activación de la kinasa ligada a integrinas (ILK) disminuyen la actividad vasodilatadora de la vía NO/GMPc. El presente trabajo estudia el papel de la ILK en la regulación del eje NO/GMPc a nivel renal y sus consecuencias sobre la filtración glomerular en un modelo murino knock-out condicional para la ILK en condiciones basales o tratados con un donador de NO. El grupo knock-out mostró basalmente poliuria y mayor aclaramiento de creatinina en comparación con el control, debido a una mayor expresión de GCs y PKG. El tratamiento con el NO aumentó de manera sinérgica ambas medidas en el grupo knock-out. Aunque el tratamiento con el donador de NO produjo taquifilaxia en ambos grupos, los niveles de GCs y PKG en los animales knock-out se vieron compensados en parte con respecto a los controles. La deleción de la ILK favorece la filtración glomerular y además revierte parcialmente los efectos de tolerancia debidos a un tratamiento prolongado con donadores de NO.

Dianas 2(1) > González-Barahona etal

Dianas | Vol 2 Num 1 | marzo 2013 | e20130304

Análisis crítico de ensayos clínicos de preparaciones de medicina herbal china.

Jorge González Barahona, Ana Belén Fernández Martínez, Francisco Javier de Lucio Cazaña

Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina, Universidad de Alcalá de Henares, CP: 28800.

a. j.gonzalez@uah.es  b. javier.lucio@uah.es

Palabras clave: Medicina Herbal China; Ensayos Clínicos; Eficacia

Resumen

La Medicina Herbal China (MHC) es un arte con más de 2000 años de antigüedad basado en la experiencia extraída del uso de plantas. Se han descrito varios casos de toxicidad relacionada con MHC y actualmente su consumo está extendido a nivel mundial. Esto genera un cierto riesgo sólo justificable si existen pruebas de eficacia. Objetivos: 1) Evaluar las pruebas de eficacia de los Ensayos Clínicos (EC) en MHC accesibles en bases de datos 2) Estudiar indicadores bibliométricos de estos EC 3) Analizar la calidad metodológica 4) Identificar los principales errores. Resultados y Discusión: El 61% de los EC en MHC analizados presentaron una calidad metodológica pobre, de manera que sólo un 31 % cumplía los requisitos exigibles para proceder a analizar su eficacia: solo uno de ellos sugirió ser eficaz. Las supuestas cualidades curativas de la MHC requieren más EC bien realizados. Conclusiones: Salvo alguna excepción, no existen pruebas fiables de la eficacia de la MHC como sistema terapéutico.

Dianas 2(1) > Pereiro-Díez y Ropero

Dianas | Vol 2 Num 1 | marzo 2013 | e20130305

Análisis de la metilación de CFTR, HTR1B, GSTM2 y PENK en lineas celulares tumorales.

Xandra Pereiro Díez, Santiago Ropero

Departamento de Bioquímica y Biología molecular, Facultad de medicina, Universidad de Alcalá, 28871, Madrid.

a. xandra.pereiro@gmail.com  b. santiago.ropero@uah.es

Palabras clave: epigenética; metilación del DNA; cáncer; CFTR; HTR1B; GSTM2; PENK

Resumen

Las modificaciones epigenéticas regulan la expresión génica pero no producen cambios en la secuencia nucleotídica. La metilación del DNA es la modificación epigenética mejor estudiada en cáncer, y en concreto el sileciamiento de genes por hipermetilación de su promotor, que es un cambio importante quepuede ser de utilidad para el diagnostico precoz de la enfermedad. En este trabajo nos hemos centrado en el análisis de la metilación y expresión de CFTR, HTR1B, GSTM2 y PENK, en líneas celulares de cáncer de próstata, mama, neuroblastoma, piel, colon, pulmón, cervix y tiroides. Los resultados obtenidos nos indican que la metilación de estos genes no es un hecho específico de un solo tipo tumoral ya que se encuentran metilados en al menos una línea celular de todos los tipos de tumores analizados. En la mayor parte de los casos la metilación del promotor provoca una disminución en los niveles de mRNA y proteína. Además, la pérdida de metilación inducida por el tratamiento con agentes desmetilanes provoca la reexpresión de los genes metilados, lo que confirma la relación entre metilación y pérdida de expresión.