dianas 8(1) > Lodewijk etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903p03

Prognostic and predictive immune gene signatures and correlation with homologous recombination deficiency in high grade serous ovarian cancer.

Iris Lodewijk^a, Marta Dueñas, Cristian Suárez-Cabrera, Rosa García-Martín, Luis Manso, Jesús M. Paramio

CIEMAT-IMAS12.

a. irisadriana.lodewijk@externos.ciemat.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España
Sesión de paneles.

Keywords: High grade serous ovarian cancer; Homologous recombination deficiency; Immune gene signatures; Immunotherapy

Abstract

The majority of patients with epithelial ovarian, fallopian tube, or primary peritoneal cancer presents with advanced malignancy (stage III or IV disease). Standard treatment consists of primary debulking surgery (PDS) followed by chemotherapy, whereas neoadjuvant chemotherapy (NACT) can be given to patients who have unresectable disease or represent poor surgical candidates. Multiple studies have indicated that survival after NACT approximates that of suboptimal PDS. Approximately 50% of high grade serous ovarian cancers (HGSOCs) display genetic and epigenetic alterations in genes of the homologous recombination (HR) DNA repair pathway, mostly in BRCA1 and BRCA2 genes. A recent study demonstrated that tumors with higher neoantigen load show increased expression of immune genes related to tumor cytotoxicity. Moreover, immune checkpoint inhibitors (such as PD-1 and PD-L1) have shown remarkable efficacy against various hypermutated cancers. This might be due to the increased amount of tumor-specific neoantigens in hypermutated lesions which stimulates the recruitment of an elevated number of tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) and is counterbalanced by the increased expression of immune checkpoints. Additionally, BRCA1/2-mutated tumors have been found to show a significantly increased amount of CD3+ and CD8+ TILs, and enhanced expression of PD-1 and PD-L1 in HR deficient tumor-associated immune cells compared to HR proficient tumors. Taken together, there might be a link between BRCA1/2-mutation status and immunogenicity, and BRCA1/2-mutated HGSOCs might be more sensitive to immune checkpoint inhibitors compared to HR-proficient HGSOCs. Accordingly, this project is focused on the study of prognostic and predictive immune gene signatures and correlation with homologous recombination deficiency in HGSOC, using a combination of Immunohistochemistry, Nanostring Immuno-Oncology Assay and targeted Sequencing using Foundation one technologies. For this study, we intend to use a patient population consisting of 90 matched samples HGSOC (n=45 pts), treated with neoadjuvant induction chemotherapy (carboplatin and paclitaxel standard dose). The matched samples will be baseline biopsy and samples from Interval Debulking Surgery (IDS). We hypothesize that homologous recombination deficiency in high grade serous ovarian cancer results in a higher tumor-specific neoantigen load, and, therefore, increased tumor-infiltrating lymphocytes as well as increased expression of the immune checkpoint genes.

dianas 8(1) > García-Pastor etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903p02

Papel de la PGE₂ en la muerte inducida por hipoxia de células proximales tubulares.

Coral García-Pastor, Selma Benito-Martínez, Ana Fernández-Martínez, Javier Lucio-Cazaña

Universidad de Alcalá.

a. coralgarciapastor@gmail.com  b. selma.benito@uah.es  c. javier.lucio@uah.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España
Sesión de paneles.

Resumen

La hipoxia tisular es uno de los factores implicados en el desarrollo tanto de lesión renal aguda como crónica. Las células proximales tubulares (CPT) son particularmente susceptibles a la disponibilidad de oxígeno y se ha demostrado que la hipoxia puede llegar a inducir su muerte. Durante la hipoxia se produce un acumulo del factor inducible por hipoxia-1 (HIF-1α), que activa la transcripción de sus genes diana, entre los que se encuentra la ciclooxigenasa 2 (COX-2). COX-2 participa en la síntesis de diferentes tipos de prostaglandinas (PG), como PGE₂, que posteriormente se une a los receptores EP y activa diferentes vías de señalización. Estudios previos de nuestro laboratorio han demostrado que PGE₂ intracelular (iPGE₂) media la apoptosis inducida por cisplatino en CPT, que puede ser prevenida al inhibir el transportador de PGE₂ al interior celular con bromosulfoftaleina y, otros autores, también han demostrado su implicación en diferentes modelos de muerte celular. En este trabajo analizamos el papel que desempeñaba la vía COX-2/iPGE₂/receptores EP en la muerte por hipoxia. Para ello, inhibimos la vía mediante inhibidores de COX-2 y del trasportador de prostaglandina PGT (transportador responsable del aumento de los niveles intracelulares de iPGE₂ gracias a la captura por la célula de PGE₂ desde el medio extracelular), así como antagonistas de los receptores EP. Observamos que, en todos los casos, se produjo una reducción significativa de la apoptosis celular. Estos resultados indicaron que la vía COX-2/iPGE₂/receptores EP estaba implicada en la muerte inducida por hipoxia en células CPT. Estos resultados sugieren que los receptores EP intracelulares median la muerte por apoptosis inducida por hipoxia de las células proximales tubulares.
En conclusión, nuestro trabajo sugiere que el transportador de captación de PGE₂ puede ser una buena diana terapéutica para la prevención de la muerte de CPT inducida por hipoxia.

dianas 7(1) > Limón etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803p03

On the role of Arabidopsis thaliana Nuclear Envelope-associated proteins in DNA repair.

José Carlos Limón, Mónica Pradillo, Juan Luis Santos

Departamento de Genética de la Universidad Complutense de Madrid.

a. josec.limon@hotmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión de paneles

Abstract

The nuclear envelope (NE) is a multifunctional platform involved in different processes such as nuclear transport, mechanotransduction, genome reorganization and DNA integrity maintenance. At the structural level, the NE presents an outer nuclear membrane (ONM) and an inner nuclear membrane (INM) separated by a perinuclear space. There are distinct proteins embedded within both membranes that connect the nucleus and the cytoplasm. Among them, LINC complexes, composed of the outer KASH and inner SUN nuclear membrane proteins, link the chromosomes with components of the cytoskeleton, whereas Nuclear Pore Complexes (NPCs), formed by multiple nucleoporins, play an essential role in the nucleocytoplasmic transport. The aim of this study is to determine the possible participation of SUN proteins and nucleoporins in DNA repair mechanisms using Arabidopsis thaliana as a working model. For doing this purpose, mutant plants for the corresponding genes were exposed to several genotoxic agents (cisplatin, mitomycin C, gamma-rays and UV-C radiation) that produce different types of DNA lesions. In addition, the expression levels of the critical genes involved in the different DNA repair pathways were analysed by qPCR. The results suggested that mutants deficient in SUN proteins and also in the plant-specific nucleoporin NUP136 are hypersensitive to agents that cause DNA double-strand breaks (DSBs). Furthermore, the qPCR analyses confirmed that the expression of genes involved in Homologous Recombination (HR), and some of those involved in Non-Homologous End Joining (NHEJ) were overexpressed in the mutants respect to wild type plants. The function of these NE-associated proteins in specific DNA repair pathways and chromatin dynamics will be discussed.

dianas 7(1) > Martínez-Martínez etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803p14

Efecto de Resveratrol en células de cáncer de próstata dependiente e independientes de andrógenos: papel de la fosfatasa DUSP1.

Desirée Martínez-Martínez, Altea Soto Neira, Antonio Chiloeches Gálvez, Marina Lasa Benito

Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto Sols.

a. desireemartinezmartinez@gmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión de paneles

Resumen

Uno de los tumores más frecuentemente diagnosticados en la actualidad es el cáncer de próstata. En las primeras fases, la mayoría de tumores son sensibles a andrógenos, siendo la ablación androgénica la principal acción terapéutica. Sin embargo, en los estadios más avanzados, el tumor comienza a hacerse resistente a andrógenos, existiendo muy pocas opciones terapéuticas en estos casos, por lo que el estudio de los mecanismos moleculares que determinan el progreso de esta enfermedad resulta de especial interés. En los últimos años, tanto la MAPK fosfatasa DUSP1, como el agente natural Resveratrol (Resv) han emergido como moléculas prometedoras en la prevención y tratamiento del cáncer de próstata, por sus efectos anti-tumorales a diferentes niveles. El objetivo de este trabajo ha sido comparar el papel que juega la fosfatasa DUSP1 en el efecto de Resv en dos líneas celulares de cáncer de próstata, las células LNCaP (dependientes de andrógenos) y las células DU145 (independientes de andrógenos). Nuestros datos indican que Resv produce una disminución, tanto de la actividad del factor pro-supervivencia NF-ĸB, como de la proliferación en ambos tipos celulares. Por otra parte, demostramos que este fitoestrógeno induce un aumento de la expresión de DUSP1 exclusivamente en las células independientes de andrógenos DU145. Consecuentemente, la sobreexpresión de la fosfatasa DUSP1 produce una disminución de la actividad NF-ĸB y un efecto anti-proliferativo en células DU145, pero no en células LNCaP. Estos datos sugieren que los mecanismos anti-proliferativos del Resv pueden ser dependientes o independientes de DUSP1 y abren la posibilidad de estudiar la posible interacción entre dicha fosfatasa y la señalización mediada por el receptor de andrógenos en cáncer de próstata.

dianas 7(1) > Fernández-Martín etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803p13

Diseño de un péptido mimético específico contra AKT como diana terapéutica para inhibir la transición epitelio-mesénquima (TEM) en cáncer de pulmón.

Begoña Fernández Martín, Paola Pinto Hernández, Lucía González Martínez, Elena Gutierrez Galindo

Universidad de Alcalá.

a. begobiologa@gmail.com  b. paolapintohh@gmail.com  c. elenagutig@gmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión de paneles

dianas 7(1) > Matamoros-Recio etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803p12

Heteroaromatic azonia cations with application as DNA fluorescent probes.

Alejandra Matamoros Recio, Pedro Bosch, David Sucunza, Francisco Mendicuti, Juan José Vaquero, Alberto Domingo

Universidad de Alcalá.

a. alejandra-m-r@hotmail.es

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión de paneles

Resumen

The fluorimetric detection and visualization of biomacromolecules is a key technique in bioanalytical chemistry. Fluorescent probes whose emission intensity increases upon association with biomacromolecules such as DNA or proteins (“light-up probes”) are useful markers in genomics and proteomics. These probes can be used to stain subcellular structures in fluorescence microscopy, flow citometry and cell sorting, or to stain nucleic acids and proteins in gel electrophoresis. Condensed polyaromatic azonia cations are a family with good fluorescent and DNA intercalating properties. However, the fluorescence intensity of most of these tested cations is efficiently quenched upon complexation with DNA. Herein, we report a small library of azonia cations based on benzimidazolium core. Some of them have shown a significantly fluorescence increase upon DNA addition and promising properties as live-cell fluorescent stains in confocal microscopy of live HeLa cells.

dianas 7(1) > Elvira-Blázquez y Díaz-Gago

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803p11

Screening de inhibidores de NFATc1 para el tratamiento de la osteoporosis.

Daniel Elvira Blázquez, Sergio Díaz Gago

Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina, UAH.

a. daniel.elvira@edu.uah.es  b. sergio.diazgago@edu.uah.es

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión de paneles

Resumen

La osteoporosis es una enfermedad caracterizada por el aumento de la fragilidad esquelética debido a una disminución de la masa y calidad ósea, que se debe a un desequilibrio en el balance entre osteoblastos/osteoclastos y que afecta fundamentalmente a cadera, espina vertebral y muñeca. Uno de los motivos de dicho desequilibrio se debe a una mayor diferenciación de monocitos a osteoclastos, proceso regulado por los osteoblastos a través del M-CSF y RANKL. RANKL, se expresa en la membrana de los osteoblastos, y al unirse a su receptor en las células precursoras de osteoblastos, provoca la activación de las vías de señalización de las MAPK de ERK y JNK, de la vía de NF-kB y de la vía de la PLC-calcineurina. Estas vías aumentan la expresión y actividad del factor de transcripción NFATc1, el cual una vez en el núcleo, regula la expresión de proteínas intervienen en la diferenciación y fisiología del osteoclasto. Debido al papel fundamental de NFATc1 en la diferenciación de los osteoclastos, nuestro objetivo es la búsqueda de nuevos inhibidores de NFATc1, en concreto nos centramos en moléculas que inhiban la interacción de NFATc1 con su activador, la calcineurina, que se encarga de defosforilar y por tanto permite su translocación al núcleo. En base a esto y las estructuras de ambas proteínas, diseñamos un HTS que permite encontrar moléculas que inhiban dicha interacción. NFATc1 interacciona con Calcineurina a través de la secuencia consenso de NFATc1, DQYLAVP, y la Calcineuina a través de 4 aminoácidos que interaccionan con dicha secuencia consenso. Las moléculas que diseñamos para inhibir dicha interacción se basan en mimetizar los 4 aminoácidos de la Calcineurina. Para realizar el “screening” de los compuestos miméticos, se realizaron 3 construcciones distintas, una para la subunidad A de la Calcineurina, otra de la subunidad B de la Calcineurina y una tercera para NFATc1. El resultado de estos clonajes serán la Calcineurina con la etiqueta molecular CFP en la subunidad A y NFATc1 con YFP, las cuales empleamos para realizar el primer cribado “in vitro” mediante la técnica del FRET. Aquellos inhibidores que impidieron la interacción entre NFATc1 y Calcineurina, pasaron a un segundo cribado “in vivo” en el que incubamos células osteoclásticas con los inhibidores, y tras su lisado, realizamos un ensayo ELISA para detectar los niveles de p-NFATc1. Finalmente, probamos la toxicidad de los inhibidores empleando células HepG2.

dianas 7(1) > Recio-Aldavero etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803p10

Optimización del método de aislamiento de exosomas en orina.

Jorge Recio Aldavero, Ángeles Sanchís Bonet, Marta Barrionuevo González, Ana María Bajo Chueca

a. jorge.recio@hotmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión de paneles

dianas 7(1) > Herraiz-López etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803p01

Exosomas en sangre como biomarcadores diagnóstico y pronóstico en el cáncer de próstata.

María Herraiz López, Ana María Bajo Chueca, Ángeles Sanchís Bonet

1. Hospital Universitario Príncipe de Asturias. Carretera Alcalá-Meco S/N, Alcalá de Henares, Madrid. España.  2. Departamento de Biología de Sistemas, Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

a. maria.herraiz.lopez@gmail.com  b. ana.bajo@uah.es

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión de paneles

Palabras clave: exosomas; cáncer de próstata; diagnóstico; pronóstico; biomarcadores

Resumen

El cáncer de próstata (CP) es la neoplasia primaria más frecuente en nuestro entorno, con una mortalidad del 18%. Como biomarcadores séricos para su diagnóstico y pronóstico, se utilizan el antígeno prostático específico (PSA) y sus derivados (densidad de PSA, fracción libre de PSA y [-2]proPSA), además de la calicreína humana 2. Desde el punto de vista diagnóstico, el PSA es muy sensible pero poco específico y además en la enfermedad hormonorefractaria no resulta útil para su seguimiento. Recientemente, marcadores genómicos (como el PCA3) han mostrado su utilidad discriminando a varones con alto riesgo de desarrollar CP y cánceres agresivos, por lo que podrían ser una fuente de dianas terapéuticas en un futuro. En este contexto, los estudios sobre exosomas están arrojando resultados muy prometedores, aunque no existe una validación de los mismos desde el punto de vista diagnóstico y pronóstico. Esta revisión pretende demostrar la utilidad de los exosomas en sangre en el diagnóstico y pronóstico del CP. Los exosomas son nanovesículas liberadas por todos los tipos celulares que intervienen en la comunicación intercelular, pero también están implicados en el desarrollo y progresión del cáncer. Contienen proteínas, ácidos nucleicos, lípidos y metabolitos, que portan información y material genético de las células que los secretan. Se caracterizan por la presencia de proteínas específicas: tetraspaninas, proteínas transportadoras (ESCRT), anexinas, proteínas de choque térmico, integrinas y GTPasas de la familia RAB. Los exosomas secretados por la próstata (prostatosomas) pueden aislarse en semen, tejido, sangre y orina. Existen varios métodos de extracción y purificación: centrifugación secuencial y ultracentrifugación, filtración, aislamiento basado en inmunoafinidad y técnicas de microfluídos. Los prostatosomas se obtienen del plasma de pacientes con CP (centrifugación de la sangre extraída por venopunción), mediante ultracentrifugación o utilizando conjugados con anticuerpos anti-CD9 y anti-antígeno de membrana próstata específico (PSMA). Como los prostatosomas son únicos en tamaño, composición lipídica y contenido proteico, pueden identificarse por Western blotting, cuantificación proteica o microscopía electrónica de transmisión; así como detectando marcadores prostáticos (PSMA y receptor androgénico). El reto es encontrar biomarcadores específicos en la superficie de prostatosomas de células cancerosas que permitan aislarlos del resto de exosomas en líquidos biológicos, aumentando su utilidad clínica. Los exosomas están implicados en el crecimiento y progresión tumoral, angiogénesis, preparación de nichos pre-metastásicos y resistencia al tratamiento. La concentración de exosomas séricos es mayor en pacientes con cáncer. En hipoxia (relacionada con mal pronóstico, fracaso de tratamiento y recaídas), se secretan más prostatosomas y contienen más triglicéridos y proteínas que promueven la transición epitelio-mesenquimal, invasividad e indiferenciación celular, y aumentan la expresión de actina en fibroblastos de próstata normales, dando lugar a un fenotipo de fibroblasto asociado a cáncer. Los exosomas séricos revelan información de las células que los secretan, usándose como “biopsia líquida” para identificar nuevos marcadores en el diagnóstico temprano, pronóstico y búsqueda de nuevas terapias frente al cáncer. Por tanto, los análisis de exosomas ofrecen una oportunidad única para desarrollar nuevos biomarcadores de proteínas y/o ácidos nucleicos para detectar y monitorizar CP, especialmente en el CP metastásico y hormono-refractario.