dianas 9(1) > Bort etal

dianas | Vol 9 Num 1 | marzo 2020 | e202003a09

Desregulación del metabolismo lípido en células de carcinoma hepatocelular resistentes a sorafenib.

Alicia Bort, Belén G. Sánchez, Irene de Miguel, José María Mora-Rodríguez, Pedro Mateos-Gómez, Inés Díaz-Laviada

Universidad de Alcalá.

a. aliciabort@gmail.com

V Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2020.
16-18 de marzo, 2020. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Keywords: HCC; resistencia; sorafenib; metabolismo; AMPK

Abstract

El carcinoma hepatocelular (HCC) es la tercera causa de muerte por cáncer en todo el mundo, siendo su principal tratamiento obstaculizado frecuentemente por la aparición de quimiorresistencia al inhibidor multiquinasa sorafenib. Por ello, creamos un modelo de HCC resistente a sorafenib, generando dos líneas celulares (HepG2SF1 y Huh7SF1) mediante incubación con concentraciones crecientes de sorafenib durante 12 meses.En estas líneas hemos analizado los cambios metabólicos que se producen a fin de encontrar una diana que permita combatir la quimiorresistencia. Estudios recientes afirman que los cambios metabólicos en las células tumorales pueden causar una desregulación en la señalización que puede participar en el desarrollo, resistencia y recurrencia del tumor y, por ello el objetivo de este trabajo ha sido estudiar el metabolismo lipídico en las células resistentes a sorafenib. Las células HepG2SF1 y Huh7SF1 mostraron acumulación intracelular de lípidos neutros, determinados mediante citometría de flujo y microscopía confocal. El estudio del metabolismo lipídico tambien reveló que las células HepG2SF1 y Huh7SF1 tienían aumentada la expresión de las enzimas involucradas en la síntesis de novo de lípidos, ATP-citrato liasa (ACLY), acetil-CoA carboxilasa (ACC) y ácido graso sintasa (FASN) y la del transportador de ácido grasos CD36. Por otro lado analizamos el sensor metabólico celular, la quinasa activada por AMP (AMPK) observando que tanto la fosforilación como los niveles totales de AMPK disminuyeron en las células resistentes en comparación con las células parentales. Es interesante resaltar que, la transfección de AMPK en las células HepG2SF1 y Huh7SF1 restableció los niveles de las enzimas lipogénicas y disminuyó la acumulación de lípidos intracelulares además de disminuir la resistencia a sorfenib. Estos resultados indican que AMPK puede ser una diana prometedora en células resistentes a sorafenib para restablecer el metabolismo lipídico y así evitar la resistencia al fármaco.

dianas 9(1) > Mora-Rodríguez etal

dianas | Vol 9 Num 1 | marzo 2020 | e202003a08

Influencia de las principales alteraciones genéticas en cáncer de próstata en la reparación del DNA.

José María Mora-Rodríguez, Irene de Miguel, Alicia Bort, Belén Sánchez Gómez, Inés Díaz-Laviada, Pedro Antonio Mateos-Gómez

Departamento de Biología de Sistemas. Universidad de Alcalá. Campus Universitario - C/ 19, Av. de Madrid, Km 33,600, 28871 Alcalá de Henares, Madrid.

a. josemmoraro@gmail.com

V Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2020.
16-18 de marzo, 2020. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: POLQ; Polθ; Alternative-NHEJ; homologous recombination; CRISPR/Cas9 targeting

Resumen

Procesos celulares como la replicación y transcripción del DNA y la exposición a diversos factores ambientales químicos y físicos inducen lesiones en el DNA. Dentro de estas lesiones, las más peligrosas son las roturas de doble cadena (DSB), en las que ambas cadenas de DNA se rompen pudiendo provocar inestabilidad genómica y alteraciones genéticas cuando se reparan incorrectamente. Existen tres vías de reparación de DSB: la recombinación homóloga (HR), la unión de extremos no homólogos clásica o Classical Non-Homologous end-joining (C-NHEJ) y la unión de extremos no homólogos alternativa o Alternative Non-Homologous end-joining (A-NHEJ). Este último mecanismo suele usar micro-homologías para unir los extremos de la rotura, lo que aumenta en gran medida la probabilidad de error. Una proteína fundamental en el mecanismo de A-NHEJ es la polimerasa Theta (Polθ) codificada por POLQ. Resultados previos han demostrado que Polθ podría ser una nueva diana terapéutica en tumores de mama y ovario. En este trabajo estudiaremos la actividad de Polθ en cáncer de próstata (PC), el cual es uno de los más comunes y la quinta causa de muerte por cáncer en varones. Algunas de las alteraciones genéticas más comunes en tumores primarios de PC son la fusión de un gen regulado por andrógenos y el factor de transcripción ERG (TMPRSS2-ERG), y mutaciones en el gen SPOP (proteína POZ tipo Speckle), que está mutado en el 10-15% de los PCs. En la mayoría de los PCs avanzados, los genes más alterados son PTEN (homólogo de fosfatasa y tensina) que está implicado en la inhibición de la vía de supervivencia PI3K-AKT-mTOR; Retinoblastoma 1 (RB1) y N-Myc, los cuales conducen a la adquisición de resistencia a los tratamientos actuales. Todas estas alteraciones podrían afectar a la elección del mecanismo de reparación de DSB. En este estudio, para poder cuantificar la reparación mediada por el A-NHEJ y la influencia de estas alteraciones genéticas, utilizaremos la nucleasa Cas9 y un plásmido reportero. Éste es una construcción lentiviral que contiene el sitio de corte para Cas9 y así poder introducir un DSB, y que permite cuantificar el uso de A-NHEJ mediante la expresión de GFP. En consecuencia, cuantificar la actividad de Polθ. Por tanto, el objetivo de este trabajo es estudiar cómo las alteraciones genéticas anteriormente mencionadas influyen en la reparación de DSB por A-NHEJ.

dianas 9(1) > Díaz-Gago etal

dianas | Vol 9 Num 1 | marzo 2020 | e202003a06

Estudio de la dependencia y regulación de la síntesis de ácidos grasos en células tumorales tiroideas que expresan el oncogén ^V600EBRAF.

Sergio Díaz Gago, Beatriz Gallego Tamayo, Pablo Baquero Valls, Antonio Chiloeches Gálvez

Universidad de Alcalá.

a. sergio.diazgago@edu.uah.es

V Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2020.
16-18 de marzo, 2020. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: Cáncer de tiroides; V600EBRAF; Síntesis de ácidos grasos; C75

Resumen

El cáncer de tiroides es la malignidad más común del sistema endocrino. El subtipo de cáncer de tiroides más agresivo es el carcinoma anaplásico tiroideo (ATC). Una mutación frecuentemente observada en los ATC es ^V600EBRAF, la cual provoca la activación constitutiva de la quinasa, favoreciendo así la progresión tumoral. Durante el tratamiento consistente en la inhibición de ^V600EBRAF, en algunos casos, se desarrollan resistencias, por lo que es necesario la búsqueda de nuevas terapias para el tratamiento de tumores con dicha mutación. Puesto que las células tumorales dependen en gran medida del metabolismo lipídico para satisfacer sus requerimientos proliferativos y energéticos, su modulación ofrece una buena opción para el desarrollo de nuevas terapias dirigidas. De hecho, se ha observado que la inhibición de rutas metabólicas, como la síntesis de ácidos grasos (AG), tiene efectos antiproliferativos en células tumorales. Por ello, nuestro objetivo es determinar si las células 8505C y BHT101, derivadas de ATC y que expresan ^V600EBRAF, dependen de la síntesis de AG para su supervivencia. Nuestros resultados demuestran que las células dependen de la síntesis de AG para la supervivencia celular, debido a que el C75, un inhibidor de la ácido graso sintasa (FASN), provoca un descenso en la viabilidad dependiente de la dosis y tiempo empleados. Este descenso en la viabilidad se debe a que el C75 provoca un arresto del ciclo celular en las fases G₂/M que acaba induciendo muerte celular por apoptosis. Posteriormente, habiendo visto la dependencia de nuestras células por la síntesis de AG, estudiamos la posible regulación que ejerce ^V600EBRAF en la expresión y/o actividad de enzimas implicadas en dicha ruta. El inhibidor de ^V600EBRAF PLX4720 provoca un descenso en la expresión de FASN, explicable por el hecho de que también descienden los niveles de SREBP1 maduro. El descenso en los niveles de proteínas implicadas en la lipogénesis se debe a que la inhibición de ^V600EBRAF, y por tanto de la vía ERK/MAPK, provoca la activación de AMPK y la inhibición de mTORC1, siendo ambos reguladores del proceso de maduración de SREBP1. Además, la inhibición la vía ERK/MAPK que provoca el PLX4720 aumenta la fosforilación inhibitoria, producida por AMPK, en la acetil-CoA carboxilasa (ACC), por lo que disminuye su actividad. Por último, estudiamos el uso de la terapia combinada consistente en la inhibición conjunta de ^V600EBRAF y la síntesis de AG. El uso combinado de PLX4720 y C75 no tiene efecto aditivo en la inhibición de la viabilidad ni en la inducción de la apoptosis. Esto puede ser debido a que ambos inhibidores provocan arrestos del ciclo celular en distintas fases, así como efectos contrarios de la actividad de proteínas como ERK, mTORC1 y AMPK, y por tanto, ejercen efectos opuestos en la maduración de SREBP1.