dianas 8(1) > Sánchez etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a24

La combinación de docetaxel y capsaicina inhibe sinérgicamente el crecimiento de células de cáncer de próstata (comunicación).

Belén G. Sánchez^a, Alicia Bort, Irene de Miguel, Pedro A. Mateos-Gómez, Nieves Rodríguez-Henche, Inés Díaz-Laviada

a. belensg.88@gmail.com

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

Palabras clave: Docetaxel; capsaicina; sinergia; células PC3; células LNCaP; cáncer de próstata.

Resumen

La quimioterapia actual para el cáncer de próstata resistente a la castración se basa en compuestos derivados de taxanos como el docetaxel. Sin embargo, en ocasiones, la aparición de efectos secundarios tóxicos y resistencia limita el beneficio terapéutico, siendo la principal preocupación en el tratamiento del cáncer de próstata. Las terapias combinadas en muchos casos mejoran la eficacia del fármaco y retrasan la aparición de efectos no deseados, lo que constituye una alternativa para el tratamiento del cáncer de próstata resistente a la castración. En este estudio, comprobamos la eficacia del tratamiento combinado de docetaxel y capsaicina, el compuesto responsable del sabor picante de los pimientos, en la proliferación de células de cáncer de próstata. Los resultados obtenidos mostraron que el tratamiento combinado de docetaxel y capsaicina inhibió sinérgicamente el crecimiento de las células LNCaP y PC3, con un índice de combinación inferior a 1 para la mayoría de las combinaciones probadas. Además, el tratamiento combinado disminuyó notablemente la fosforilación de Akt y de sus dianas mTOR y S6, situadas por debajo en su cascada de transducción. Por otro lado, la disminución de la expresión de Akt impidió el efecto antiproliferativo del docetaxel, mientras que potenció el de la capsaicina. Todo esto sugiere que el efecto antiproliferativo sinérgico podría atribuirse a la inhibición de la vía de señalización PI3K/Akt/mTOR. A su vez, los experimentos in vivo confirmaron el efecto sinérgico del docetaxel y la capsaicina para reducir el crecimiento tumoral de células PC3 en ratones inmunodeficientes. En conclusión, nuestros resultados indican que el tratamiento combinado de docetaxel y capsaicina constituye un enfoque terapéutico relevante para el tratamiento del cáncer de próstata.

dianas 8(1) > Díaz-Gago etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a23

Inhibición de la β-oxidación de ácidos grasos como tratamiento en células tumorales tiroideas que expresan V600EBRAF

Sergio Díaz Gago, Beatriz Gallego Tamayo, Antonio Chiloeches Gálvez

a. sergio.diazgago@edu.uah.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A2, Cáncer.

Palabras clave: ATC; V600EBRAF; CPT1; Etomoxir; PLX4720

Resumen

El cáncer de tiroides es la patología más común del sistema endocrino y se estima que representa aproximadamente el 3% de los cánceres diagnosticados en EE.UU. El subtipo de cáncer de tiroides más agresivo es el carcinoma anaplásico tiroideo (ATC). Una mutación frecuentemente observada en los ATC es V600EBRAF, la cual provoca la activación constitutiva de la quinasa, favoreciendo la progresión tumoral. La inhibición de V600EBRAF provoca resistencias al tratamiento, por lo que son necesarias nuevas terapias para el tratamiento de tumores con esta mutación. Puesto que las células tumorales dependen en gran medida del metabolismo lipídico para satisfacer sus requerimientos proliferativos y energéticos, su modulación ofrece una buena opción para el desarrollo de terapias. En concreto, la inhibición de rutas metabólicas, como la oxidación de ácidos grasos tiene efectos antiproliferativos. Por ello nuestro objetivo es determinar la dependencia que tienen las células BHT101, derivadas de ATC y que expresan V600EBRAF, de la oxidación de ácidos grasos para su supervivencia, así como los cambios en las proteínas AMPK y mTORC1, dos reguladores maestros del metabolismo celular. Nuestros resultados demuestran que las células derivadas de carcinoma anaplásico tiroideo dependen de la oxidación de ácidos grasos para la supervivencia celular, debido a que el etomoxir, un inhibidor de la CPT1, provoca un descenso en la viabilidad, que se acompaña de la activación de AMPK y la inhibición de mTORC1. Además, observamos que la inhibición de la degradación de los ácidos grasos provoca un aumento en la producción de lactato, lo que sugiere que está aumentando el flujo glucolítico como compensación ante la pérdida de los ácidos grasos como sustrato energético. Por último, destacamos la terapia combinada de la inhibición de V600EBRAF y de la β-oxidación como una prometedora forma de tratamiento para los tumores que presentan dicha mutación, ya que el tratamiento combinado del PLX4720 con el etomoxir provoca un efecto antiproliferativo mayor tanto en viabilidad como en apoptosis y en la activación de AMPK, que dichos tratamientos por separado.

dianas 8(1) > Munera-Maravilla etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a22

Improving immunotherapy through chromatin remodelers inhibitors in bladder cancer.

Ester Munera-Maravilla, Cristina Segovia, Edurne San José-Enériz, Mónica Martínez-Fernández, Leire Garate, Estíbaliz Miranda, Amaia Vilas-Zornoza, Iris Lodewijk, Carolina Rubio, Carmen Segrelles, Luis Vitores Valcárcel, Obdulia Rabal, Noelia Casares, Alejandra Bernardini, Cristian Suarez-Cabrera, Fernando F. López-Calderón, Puri Fortes, José A. Casado, Marta Dueñas, Felipe Villacampa, Juan José Lasarte, Felix Guerrero, Guillermo de Velasco, Julen Oyarzabal, Daniel Castellano, Xabier Agirre, Felipe Prósper, Jesús M. Paramio

Centro de Investigaciones Energéticas, Medioambientales y Tecnológicas (CIEMAT) Av. Complutense, 40, 28040 Madrid.

a. ester.munera@ciemat.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A2, Cáncer.

Keywords: bladder cancer; epigenetics; immunotherapy

Abstract

Bladder cancer (BC) is a common neoplasm which is lethal in its advanced muscular invasive phase and given the very limited therapeutic advances in the field, is in urgent need of new treatments. Recent molecular characterization of BC has defined new genetic and epigenetic drivers of the disease and potential new targets. The introduction of immune checkpoint inhibitors in BC has shown remarkable efficacy but only in a limited fraction of patients. Here, we show that in human BC high expression of G9a (EHMT2), a H3K9 methyltransferase, is associated with poor clinical outcome and that the targeting of G9a/DNMT methyltransferase activity with a novel, reversible, potent and dual inhibitor (CM-272) induces apoptosis and immunogenic cell death. In vivo, CM-272 alone and particularly in combination with cisplatin (CDDP) improves survival in xenograft models of BC. Using an immunocompetent quadruple (PtenF/F; Trp53F/F; Rb1F/F;Rbl1-/-) knockout transgenic mouse model of highly aggressive metastatic muscle-invasive BC, we demonstrate that treatment with CM-272 and CDDP results in significant regression of tumors and metastases. The anti-tumor effect is significantly improved when CM-272 is combined with anti-PD-L1, even in the absence of CDDP. These effects are associated with an in vivo activation of an endogenous antitumor immune response and immunogenic cell death with the conversion of a cold immune tumor into a hot tumor. Finally, in a series of BC patients treated with PD1 inhibitors, we show that increased levels of G9a and H3K9me2 are associated with tumor resistance, suggesting that expression of G9a may be a biomarker of response to immunotherapy. In summary, these findings support new and promising opportunities for the treatment of BC patients using a combination of epigenetic inhibitors and immune checkpoint blockade.

dianas 8(1) > Gallego-Tamayo etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a21

El bloqueo de la glucolisis colabora con la eficacia terapéutica de la inhibición de V600EBRAF en células tumorales tiroideas

Beatriz Gallego Tamayo, Sergio Gago Díaz, Antonio Chiloeches Gálvez

a. bgallego28@gmail.com

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A2, Cáncer.

Palabras clave: glucolisis; 2-Deoxyglucosa; V600EBRAF; cáncer; tiroides

Resumen

El cáncer de tiroides es el tumor endocrino más común y, aunque es altamente curativo, presenta una elevada tasa de recurrencia [1]. Una de las mutaciones más frecuentes en este tipo de tumores es la sustitución de la Valina 600 por un Glutámico (V600E) en la proteína BRAF. Esta mutación causa una hiperactivación de la vía de las ERK-MAPKs, favoreciendo la proliferación e invasividad tumoral e inhibiendo la muerte celular por apoptosis [2,3]. Sin embargo, las terapias con inhibidores de BRAF no dan los resultados esperados en el tratamiento del cáncer de tiroides, ya que, por una parte, estas células crean resistencia a este tratamiento y, por otra, causan importantes efectos adversos en la piel asociados a hiperproliferación llegando, en algunos casos, a producirse carcinomas de células escamosas y queratoacantomas en un 15-30% de los pacientes [4]. Debido a esto, se plantea la necesidad de utilizar terapias combinadas para aumentar la efectividad y especificidad del tratamiento en este tipo de cáncer. Por otra parte, las células tumorales reprograman su metabolismo energético por modificaciones en la expresión y actividad de enzimas metabólicas, para favorecer la proliferación acelerada. Por ello, el metabolismo de las células tumorales es una diana emergente para el tratamiento del cáncer, pudiendo usarse como terapia combinada con otros compuestos para aumentar la eficacia del tratamiento [5-8]. Estudios previos de nuestro laboratorio nos indican que la glucolisis es necesaria para la supervivencia de las células tumorales tiroideas con el oncogén V600EBRAF, por ello estudiamos la posibilidad terapéutica de combinar la inhibición glucolítica con la 2-Desoxyglucosa (2DG) y la inhibición de BRAF con PLX4720. Nosotros demostramos, en primer lugar, que tanto la inhibición del metabolismo de la glucosa, con el compuesto 2-Deoxyglucosa, como la inhibición del oncogén, disminuyen la captura de glucosa y producción de lactato, en la línea celular BHT101, derivada de un tumor anaplásico tiroideo. A continuación, estudiamos como la inhibición conjunta del oncogén V600EBRAF y del metabolismo glucolítico afectan a la viabilidad y supervivencia de las células BHT101 tanto in vitro, mediante distintas técnicas como MTT, capacidad de formación de colonias, TMRM, análisis del ciclo celular y determinación de células no viables positivas en ioduro de propidio por citometría de flujo; como in vivo, tras la generación de tumores xenografos en ratones nude tratados con los tratamientos individuales o en combinación. Los resultados obtenidos permiten concluir que la inhibición conjunta del oncogén V600EBRAF y la glucolisis aumenta la muerte celular in vitro, de forma independiente a apoptosis. Este efecto terapéutico también se observa in vivo en cuanto al tamaño tumoral en células anaplásicas tumorales tiroideas. Además, la modulación que ejercen sobre la glucolisis ambos tratamientos parece estar relacionada con cambios en la actividad de las proteínas implicadas en el metabolismos energético de las vías AMPK/ACC y mTOR/S6K, según muestran sus niveles de fosforilación medidos por WB. Finalmente, concluimos que la inhibición de la glucolisis con 2DG podría ser usado como terapia en los tumores tiroideos con la mutación V600EBRAF que no responden adecuadamente al tratamiento convencional con PLX4720.

dianas 8(1) > Madrigal-Martínez etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a14

La prostaglandina E2 intracelular activa los fenotipos tumorales en cáncer de próstata de forma dependiente del factor inducible por hipoxia 1α.

Antonio Madrigal-Martínez, Ana Fernández-Martínez, Javier Lucio-Cazaña

a. antoniomadrigalmartinez@gmail.com

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A1, Cáncer.

Resumen

La prostaglandina E2 (PGE2) y el factor inducible por hipoxia 1α (HIF-1α) juegan un papel importante en cáncer de próstata (CP). PGE2 es capaz de incrementar la proliferación, migración e invasión celular, disminuir la adhesión celular y aumentar la angiogénesis. HIF-1α modula la transcripción de numerosos genes que contribuyen a la progresión del CP. Estudios previos de nuestro grupo de investigación han demostrado que PGE2 intracelular (iPGE2) aumenta la expresión de HIF-1α en la línea celular PC3, representativa de un estadio andrógeno-independiente de CP. Nuestra hipótesis sería si iPGE2 activa los fenotipos tumorales de forma dependiente de HIF-1α en PC3. Los resultados obtenidos muestran que la inhibición de HIF-1α bloquea los efectos de PGE2 sobre los fenotipos tumorales en células PC3. Estos resultados sugieren que el aumento de expresión de HIF-1α es fundamental para que iPGE2 active los diferentes fenotipos tumorales, contribuyendo así a la progresión de CP.

dianas 8(1) > Bort etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a13

La capsaicina activa AMPK en células HepG2 a través de CaMKKβ (comunicación).

Alicia Bort, Belén G. Sánchez, Pedro Mateos-Gómez, Irene de Miguel, Nieves Rodríguez-Henche, Inés. Díaz-Laviada

a. aliciabort@gmail.com

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A1, Cáncer.

Resumen

Los compuestos naturales que tienen efectos beneficiosos para la salud han tomado relevancia como nuevos fármacos, al presentar la capacidad de modular distintos procesos celulares. Dentro de este grupo encontramos la capsaicina que es la responsable de la “sensación de calor” que produce el picante. Recientemente ha provocado gran interés debido a sus efectos antitumorales en muchos tipos de células, aunque su mecanismo de acción en muchos casos no ha sido descrito. Como recientemente se ha descrito que la desregulación metabólica es una característica de las células cancerosas y la quinasa activada por AMP (AMPK) es el sensor clave en el metabolismo, en este estudio decidimos estudiar la capacidad de la capsaicina para modular la actividad de AMPK. Los resultados mostraron que la capsaicina activaba la AMPK en las células HepG2 al aumentar la fosforilación de la AMPK y su sustrato directo ACC. Por otro lado, determinamos que la activación de AMPK inducida por capsaicina, se producía a través de la proteína quinasa de la quinasa dependiente de calcio/calmodulina tipo β (CaMKKβ) ya que su activación con el inhibidor de CaMKK STO-609 o silenciando la proteína con siRNA. Además, la capsaicina disminuyó la viabilidad celular en células HepG2, descubriendo que AMPK está involucrada en este efecto de muerte producido por la capsaicina.

dianas 8(1) > Martínez-Martínez etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a12

Resveratrol sensibiliza las células de cáncer de próstata a la acción del Cisplatino y promueve apoptosis a través de la inducción de la fosfatasa DUSP1.

Desirée Martínez-Martínez, Altea Soto, Beatriz Gallego, Antonio Chiloeches, Marina Lasa

Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto Sols, CSIC-UAM.

a. desireemartinezmartinez@gmail.com

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A1, Cáncer.

Palabras clave: apoptosis; cisplatino; DUSP1; cáncer de próstata; resveratrol

Resumen

Resveratrol es un polifenol con propiedades antitumorales frente al cáncer de próstata, sin embargo, el mecanismo que subyace a sus efectos no ha sido completamente elucidado. Dado que previamente hemos demostrado que la fosfatasa DUSP1 induce apoptosis en células de cáncer de próstata, en este estudio, hemos querido analizar el papel de esta fosfatasa en los efectos de Resveratrol. Además, hemos analizado la eficacia del tratamiento combinado de Resveratrol con el agente quimioterápico Cisplatino sobre la viabilidad celular y la apoptosis, así como su relación con DUSP1 en células de cáncer de próstata. Nuestros resultados muestran que Resveratrol induce la expresión de DUSP1 en células de cáncer de próstata y que esta fosfatasa está implicada en la inhibición de la vía de NF-κB y de la expresión de Cox-2 mediada por el polifenol. Además, DUSP1 media la apoptosis inducida por Resveratrol, aunque no está involucrada en el arresto del ciclo celular que provoca dicho compuesto. Por último, nuestros datos demuestran que Resveratrol coopera con el agente quimioterápico Cisplatino en la regulación positiva de los niveles de DUSP1 y en la promoción de apoptosis, sugiriendo que esta fosfatasa juega un papel determinante en la sensibilización celular a la apoptosis inducida por Cisplatino. Estos resultados revelan un nuevo mecanismo mediante el cual Resveratrol induce apoptosis en células de cáncer de próstata, y resaltan la importancia de DUSP1 en nuevos enfoques terapéuticos basados en el uso de la combinación del polifenol y el cisplatino.

dianas 8(1) > Sánchez-Baltasar etal

dianas | Vol 8 Num 1 | marzo 2019 | e201903a11

Generación de modelos animales de tumores de mama deficientes en Rasa1.

Raquel Sánchez-Baltasar, Angustias Page, Isabel Ojeda-Pérez, Claudia Gil-Pitarch, Manuel Navarro, Ángel Ramírez

CIEMAT-Instituto de Investigación Hospital 12 de Octubre.

a. raquel.sanchez@externos.ciemat.es

IV Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2019.
20-22 de marzo, 2019. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España
Sesión A1, Cáncer.

Palabras clave: Cáncer de mama, Rasa1, Tpr53, CRISPR/Cas9

Resumen

El cáncer de mama es el tipo de tumor que ocupa el primer puesto en incidencia en la población femenina mundial y es uno de los que mayor mortalidad causa. A pesar de que es frecuente encontrar mutaciones en los genes clásicos de la familia de Ras en otros tipos tumorales, no lo es en cáncer de mama, aunque la vía se encuentra frecuentemente sobreactivada en algunos subtipos como los triple negativos o basales. Estudios previos en nuestro laboratorio sugieren que esto puede deberse a la pérdida alélica de RASA1 en concomitancia con mutaciones en el gen TP53, eventos frecuentes en estos subtipos tumorales que son los más agresivos y de peor pronóstico. Por ello, hemos decidido llevar a cabo un estudio en profundidad de los mecanismos moleculares que llevan al desarrollo y/o progresión del cáncer de mama como consecuencia de la alteración de estos dos genes. En consecuencia, se planteó la generación de modelos animales deficientes en Rasa1 en combinación con mutaciones en Trp53 con el objetivo de confirmar la colaboración de la activación de la vía de Ras y p53 como causante de cáncer de mama. Para el desarrollo de estos modelos animales modificados genéticamente se empleó la tecnología CRISPR/Cas9. Para ello, se diseñó una pareja de guías específicas para el gen Rasa1 con el objetivo de utilizarlas mediante dos aproximaciones diferentes. En primer lugar, con el objetivo futuro de realizar el aloinjerto de células de glándula mamaria electroporadas con las guías diseñadas para Rasa1 (e infectadas con un vector lentiviral para la sobreexpresión de una forma mutada de p53), se realizó una puesta a punto extrayendo y purificando estas células de hembras donadoras e infectándolas con un vector lentiviral que expresa la proteína GFP para trasplantarlas en la almohadilla grasa desepitelizada de hembras receptoras. Por otro lado, se empleó la tecnología CRISPR/Cas9 para realizar la edición del gen Rasa1 en estadio embrionario. Las guías específicas para este gen se introdujeron en los zigotos junto con la Cas9 en forma de ribononucleoproteína mediante electroporación por dos métodos: iGonad (“Oviductal Nucleic Acids Delivery”) o ZEN (“Zygote Electroporation of Nucleases”). En el modelo de aloinjerto se observó una reconstitución del epitelio de la glándula mamaria con las células trasplantadas a 2 meses post-trasplante, verificando la utilidad de esta aproximación para la generación de nuestro modelo. Respecto a la electroporación de los zigotos, aunque con el método iGonad no se vio edición en ninguno de los casos, con el método ZEN se consiguió un 75% de edición, donde en más del 80% de estos animales se observó un cambio de expresión de la proteína RASA1. En conclusión, tanto la aproximación del aloinjerto en la glándula mamaria como la utilización del método ZEN para la generación de modelos animales modificados genéticamente con la tecnología CRISPR/Cas9 para el gen Rasa1, pueden ser una buena aproximación para el estudio de la implicación de este gen en el cáncer de mama.