dianas 7(1) > Baz y Rivera-Arconada

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803b32

Estudio de los ritmos de actividad intrínseca en áreas sensoriales y motoras de la médula espinal de ratón.

Jorge Vicente Baz, Iván Rivera Arconada

Departamento de Biología de Sistemas. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.

a. jorge.vb10@gmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión B3 – Fisiología

Palabras clave: electrofisiología; estricnina; generadores de patrones; glicina; inflamación

Resumen

En la médula espinal existen redes de interneuronas capaces de producir una actividad rítmica generando patrones de actividad implicados en determinados comportamientos, como puede ser la locomoción. Estos circuitos o redes se han denominado como centro generador de patrones (CGP) y funcionan sin la necesidad de información aferente o de un control descendente, por lo que se pueden estudiar utilizando aproximaciones in vitro. Mediante estudios con preparaciones de médula espinal aislada se ha observado una actividad rítmica espontánea (en ausencia de estimulación) en motoneuronas, que podría ser el reflejo de determinados patrones implicados en la locomoción. Pero también se ha observado actividad en aferentes primarias, donde se genera una actividad eferente hacia la periferia denominada reflejos de la raíz dorsal (DRR). Como ocurre con el reflejo axónico (AR), esta actividad puede producir la liberación de neuropéptidos en la periferia provocando la denominada inflamación neurogénica, lo que se ha relacionado con procesos de dolor crónico. El objetivo de este trabajo es caracterizar el funcionamiento de estos circuitos neuronales intraespinales en condiciones normales y en procesos de dolor inflamatorio. Utilizamos preparaciones de médula espinal in vitro de ratones neonatos y registros electrofisiológicos de la actividad espontánea en aferentes primarias y axones de motoneuronas. Para ello se utilizaron electrodos de succión de vidrio donde se introdujeron la raíz dorsal y ventral del segmento lumbar 4 del mismo lado. Además, estudiamos los posibles cambios en el funcionamiento de estas redes intraespinales en ratones sometidos a un tratamiento inflamatorio utilizando el modelo de carragenina intraplantar. También realizamos estudios farmacológicos para determinar que neurotransmisores pueden estar involucrados. En nuestros registros hemos identificado tres tipos diferentes de eventos: eventos coincidentes en ambas raíces, eventos que solo aparecen en los registros de raíz dorsal y eventos que aparecen solo en la raíz ventral. Los eventos coincidentes tienen una amplitud mayor que los demás, mientras que los eventos únicamente ventrales son los que aparecen con más frecuencia. Tras la inflamación periférica se incrementó el número de eventos que se observan solo en la raíz dorsal. El bloqueo de los receptores de glicina con estricnina 1 µM redujo la frecuencia de los eventos correlacionados y los eventos dorsales tanto en preparaciones de ratones naïve como inflamados. Sin embargo, no modificó el número de los eventos ventrales. Estas observaciones sugieren que cada tipo de actividad podría tener un origen distinto como indicaría la diferente sensibilidad a estricnina. El incremento del número de eventos que se observa solo en el registro de aferentes primarias después de la inflamación podría deberse a cambios en la excitabilidad de estos circuitos debidos a procesos de sensibilización central. La presencia de eventos correlacionados sugiere que las aferentes primarias y las motoneuronas deben disponer de alguna forma de intercomunicación o recibir información simultanea de estos generadores, lo que podría estar implicado en la integración de información a nivel espinal.

dianas 7(1) > Santos etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803b34

Trampas Extracelulares de Neutrófilos (NETs) en trombos cardíacos: visualización y cuantificación mediante microscopía confocal.

Adrián Santos, Paloma Martín, Ana Blasco, Jorge Solano, Diego García, Javier Goicolea, Carmen Bellas, María José Coronado

Instituto de Investigación Sanitaria Puerta de Hierro - Segovia de Arana.

a. adri.santos.bio@gmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión B3 – Fisiología
Premio a la mejor comunicación.

Resumen

Los neutrófilos son los leucocitos más abundantes en sangre y constituyen una parte esencial del sistema inmune innato, considerándose una de las primeras líneas de defensa frente a infecciones y daño tisular. Después de ser reclutados y activados en el sitio de inflamación pueden actuar través de los mecanismos de fagocitosis, degranulación, producción de citoquinas y liberación de Neutrophil Extracellular Traps (NETs). Los NETs se definen como estructuras de tipo red formadas por cromatina descondensada (histonas y ADN) y proteínas granulares y citoplasmáticas. La liberación de NETs da lugar a un tipo de muerte celular conocida con el nombre de NETosis, que consiste en una forma de defensa frente a bacterias, hongos, parásitos y virus, produciendo la detención de los patógenos y su destrucción gracias a la concentración de agentes antimicrobianos en el espacio extracelular. La desregulación del proceso de NETosis se ha relacionado con gran número de patologías autoinmunes, inflamatorias, metabólicas y cardiovasculares. En las enfermedades cardiovasculares concretamente, intervienen en el proceso de trombosis promoviendo la activación y la agregación plaquetaria, sirviendo de soporte a los eritrocitos, e induciendo la generación de trombina y el depósito de fibrina. Por todo ello, el análisis de NETs en muestras de tejido se ha convertido en un tema de gran interés para comprender su papel patológico en diversas enfermedades. En este trabajo hemos desarrollado un método semiautomático de visualización y cuantificación de NETs en muestras de aspirados de trombos intracoronarios embebidos en parafina. El estudio de la colocalización de las proteínas Mieloperoxidasa e Histona 3 Citrulinada, marca inequívoca de la presencia de NETs, mediante un doble marcaje con fluorescencia y la utilización de la técnica de Microscopía Confocal nos ha permitido analizar la presencia de NETs en trombos cardiacos. Se trata de un método de cuantificación fácilmente reproducible, que podría servir para estandarizar el estudio de NETs en muestras parafinadas y así poder comparar resultados obtenidos en distintos laboratorios.

dianas 7(1) > García-Pastor etal

dianas | Vol 7 Num 1 | marzo 2018 | e201803b24

Papel de la PGE₂ intracelular en la muerte celular mediada por hipoxia en células proximales tubulares

Coral García-Pastor, Selma Benito-Martínez, Ana Belén Fernández-Martínez, Francisco Javier Lucio-Cazaña

1. Departamento de Biología de Sistemas. Universidad de Alcalá.  2. Departamento de Biología. Universidad Autónoma de Madrid.

a. coralgarciapastor@gmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión B2 – Fisiología

Palabras clave: Prostaglandina; riñón; muerte; hipoxia; túbulo

Resumen

La Prostagladina E₂ (PGE₂), producida por la acción de la enzima inducible ciclooxigenasa 2 (COX-2) y la ciclooxigenasa 1(COX-1) constitutiva, actúa a través de los receptores EP (EP1, EP2, EP3 y EP4), localizados en la membrana plasmática y es la principal prostaglandina a nivel renal. Recientemente, nuestro grupo ha demostrado la presencia de receptores EP intracelulares (iEPR) responsables de múltiples efectos producidos por la PGE₂ y que son prevenidos al tratar con bromosulfoftaleina (BS), un inhibidor del trasportador intracelular de PGE₂ La hipoxia es un factor patogénico muy frecuente para el desarrollo de patologías como la insuficiencia renal aguda o crónica. Las células tubulares proximales humanas (CPT) son altamente susceptibles a la hipoxia debido a su elevada demanda de O₂ producida por su gran actividad metabólica. Con estos antecedentes, nos propusimos estudiar el papel de la PGE₂ intracelular en la muerte inducida por hipoxia (1% O₂, 24h) en CPT. La hipoxia produjo i) un aumento de la expresión de caspasa 3 y anexina V (medidas mediante western blot y citometría de flujo), que son cambios característicos de la apoptosis y ii). Un aumento por mecanismos transcripcionales de la expresión de COX-2, así como de los niveles intracelulares de PGE₂. El aumento de la anexina V fue prevenido por la inhibición de COX-2, el antagonismo de los receptores EP, el tratamiento con BS y con antagonistas de MEK-1 y p38 (dos quinasas estrechamente relacionadas con la regulación de COX-2). Estos datos sugieren que la muerte producida por hipoxia en CPT está mediada por los niveles de PGE₂ intracelular y que la inhibición del transportador responsable de su captación por las CPT podría constituir una nueva estrategia terapéutica para el tratamiento de la apoptosis de CPT inducida por hipoxia en diferentes patologías.